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摘要背景：<br>　　口腔疾病是困扰人民生活，影响人民健康的常见疾病。在许多口腔疾病及其症状中，炎症是所有年龄患者中最常见的症状之一，常常伴有牙龈出血，口腔壁溃烂等。严重的口腔溃疡在一些放疗患者中最为常见，并且具有反复性的生物学特征，严重降低了患者的生活质量。临床数据显示口腔炎症不仅直接影响口腔的功能，还会影响许多全身性疾病的发生和发展，如动脉粥样硬化、糖尿病、神经退行性疾病、类风湿性关节炎以及其他疾病。与其他炎症一样，口腔炎症同样也可以激活炎症信号通路，最常见的是核因子κB(NF-κB)和Janus激酶(JAK)-信号转导和转录激活子(STAT)通路。这些通路被激活时会促进炎性细胞因子如白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)以及炎性蛋白相关酶(如环氧化酶-2,COX-2)的产生。因此，抑制炎症的策略之一是控制这些炎性细胞因子的产生。在本研究中，我们发现乙酰缬草素(AVT)，一种从缬草根部提取的典型成分，在口腔上皮细胞和炎症细胞中表现出强效的抗炎活性。具体机制可能与RNF6/SHP-1/STAT3信号通路的抑制有关。<br>　　目的：<br>　　本研究旨在探究乙酰缬草素的抗炎活性以及乙酰缬草素发挥抗炎作用的分子机制。<br>　　方法：<br>　　（1）利用RT-PCR实验分析乙酰缬草素是否能够抑制LPS所引起的炎症反应。<br>　　（2）运用Westernblot探究乙酰缬草素是否抑制STAT3的活化，以及能否影响STAT家族其他蛋白的活化。运用双荧光素酶报告实验探究乙酰缬草素是否对STAT3的转录活性有影响。<br>　　（3）运用Westernblot以及双荧光素酶报告实验探究乙酰缬草素是否对NF-κB的转录活性有影响。<br>　　（4）构建RNF6质粒后，利用Westernblot实验探究乙酰缬草素是否能够调控RNF6/SHP-1轴。利用免疫共沉淀实验与CHX蛋白质半衰期实验，探究乙酰缬草素能否延长SHP-1蛋白半衰期以及乙酰缬草素能否通过抑制RNF6对SHP-1的链式多聚泛素化而稳定SHP-1。<br>　　（5）运用Westernblot实验探究乙酰缬草素是否能够稳定SHP-1从而抑制STAT3的转录活性。<br>　　（6）采用双荧光素酶报告实验和RT-PCR实验探究RNF6能否促进STAT3转录活性，并且上调炎症因子和COX-2。<br>　　结果：<br>　　（1）采用RT-PCR实验分析被乙酰缬草素处理过的细胞总RNA发现：在炎症细胞RAW264.7和THP-1以及口腔细胞Cal27和SCC9之中，乙酰缬草素在0.5μM时对由LPS引起TNF-α、COX-2、IL-6的上调有抑制作用，在4μM时对此炎症反应抑制更加明显。提示乙酰缬草素可能抑制LPS引起的细胞炎症反应。<br>　　（2）Westernblot和双荧光素酶报告基因实验结果显示，0.5μM乙酰缬草素处理12h,口腔细胞Cal27和SCC9中STAT3总蛋白的表达无明显改变，但磷酸化STAT3(p-Ser727)表达较对照组明显降低。STAT4与STAT6总蛋白与磷酸化蛋白均未发生明显变化。提示乙酰缬草素抑制LPS引起的细胞炎症反应可能与STAT3蛋白有关，与STAT家族其他蛋白无关。<br>　　（3）Westernblot分析与双荧光素酶报告实验显示乙酰缬草素对NF-κB的转录活性没有影响，提示乙酰缬草素不影响NF-κB信号通路的转录活性。<br>　　（4）Westernblot结果表明乙酰缬草素能够调控RNF6/SHP-1轴。免疫共沉淀实验与CHX蛋白质半衰期实验结果显示乙酰缬草素能够延长SHP-1蛋白半衰期并且能够通过抑制RNF6对SHP-1的链式多聚泛素化而稳定SHP-1。<br>　　（5）Westernblot实验表明乙酰缬草素能够稳定SHP-1从而抑制STAT3的转录活性。<br>　　（6）双荧光素酶报告实验和Westernblot实验结果表明RNF6能够促进STAT3的转录活性，并且上调炎症因子和COX-2。并且过表达RNF6的口腔细胞培养基能够引起炎症细胞的炎症反应。<br>　　结论：<br>　　本研究发现RNF6/SHP-1/STAT3轴存在于口腔炎症相关的口腔细胞中，草药乙酰缬草素抑制该通路从而可以抑制口腔上皮细胞和炎症细胞的炎症。