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基于炔-胺点击反应改性胶原基角膜修复材料的研究

摘要角膜盲是仅次于白内障的第二大致盲眼病,到目前为止致盲性角膜病的治疗主要还是依靠角膜移植。但是受传统伦理观念等影响,我国角膜供体非常匮乏。目前,可以通过开发组织工程材料填补供体的缺口,其中最为关键的是生物材料的选择和通过交联改性进行适当的组装以适配临床的需要。<br>  胶原膜因其优异的生物相容性有望用于角膜修复的临床治疗,它可以通过自组装形成具有独特结构的纤维,并且在成膜后依旧保持网状纤维结构。但是未经进一步修饰改性的胶原由于其力学性能较弱,容易在外力作用下撕裂损坏。对胶原蛋白进行化学交联改性,可以有效提高胶原蛋白的交联密度。然而,大多数交联剂通常具有细胞毒性,因此在应用的过程中胶原蛋白需要尽量将交联剂去除。<br>  我们基于目前普遍使用的胶原交联剂的痛点,分别合成了两种不同结构的交联剂(直链双炔基聚乙二醇(DA-PEG)和支链四炔基聚乙二醇(4arm-DA-PEG))。胶原可以与这两种交联剂通过共价连接形成交联网络,制备出新开发的胶原膜(Col/DA-PEG;Col/4arm-DA-PEG)。我们通过X射线衍射、差示扫描量热法、力学性能测试、体外胶原酶降解和生物相容性等测试实验对交联剂及交联膜的结构和性能进行表征,研究了胶原纤维束间通过炔-胺点击反应对胶原蛋白的外源性交联。其中红外光谱分析证实了交联剂的成功合成和交联网络的成功构建;SEM结果表明新开发的胶原膜具有致密的纤维结构。这种致密的结构可以为缝合提供结构基础,同时可以抵抗胶原酶的降解并提高胶原膜的热稳定性。与常见的交联剂改性的胶原基角膜修复材料相比,Col/DA-PEG具有更好的光学透明性、机械性能和较低的细胞毒性。CCK-8测试表明:与戊二醛相比,DA-PEG和4arm-DA-PEG细胞毒性低,生物相容性好。力学性能测试和交联度测试证明:Col/4arm-DA-PEG交联度高,具有良好的机械性能,其缝合强度最高可以达到4.6N/mm,适用于手术缝合。这些结果表明,端炔基PEG体系可以作为理想的胶原交联剂,在提高胶原材料的缝合强度的同时维持胶原膜自组装结构,良好的生物相容性有助于此类交联剂在组织工程支架材料上的应用,尤其是在角膜修复材料上具有较大的应用前景。

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