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摘要研究背景和目的：<br>　　宫颈癌是严重威胁妇女健康的疾病之一。目前，宫颈癌的主要治疗方法包括手术、放疗及化疗，其中，根治性手术不适用于有生育需求的年轻患者，宫颈锥切术可能会增加早产、胎膜早破等不良妊娠结局的发生风险；而放化疗具有副作用大、非靶向性、多药耐药性等局限性。近年来，关于纳米技术在癌症的诊断和治疗领域的研究快速发展。在宫颈癌治疗方面，通过构建纳米载药体系，可有效减少副作用，改善治疗效果。滚环扩增（Rollingcircleamplification，RCA）因其操作简单、放大效率高等优点，现已发展成为纳米生物医学领域的一项重要技术，可用于构建多种功能性DNA纳米结构，实现生物检测、生物成像、药物递送等。本研究旨在基于RCA技术构建具有HeLa细胞靶向性的DNA纳米载药体系（Dox-DNFs），与牛血清白蛋白（Bovineserumalbumin，BSA）修饰的金纳米粒子（Goldnanoparticles，AuNPs）（BSA-AuNPs）相结合，分别通过主动靶向和被动靶向进入HeLa细胞，并在溶酶体酸性条件下发生聚集，基于质子海绵效应导致溶酶体溶胀，从而实现靶向化疗/光热联合治疗，通过体内、体外实验研究该体系对宫颈癌细胞的杀伤作用。<br>　　方法：<br>　　（1）本研究基于RCA技术构建DNA纳米花型结构（DNAnanoflowers，DNFs），用于负载并靶向递送抗肿瘤药物阿霉素（Doxorubicin，Dox）。通过将HeLa细胞核酸适体的互补序列和载药位点设计到环状模板中，基于RCA反应制备长单链DNA（Single-strandedDNA，ssDNA），进而自组装得到对HeLa细胞具有靶向识别能力的DNFs，并将所制备的DNFs作为药物载体用于负载Dox。对DNFs和载药DNFs（Dox-DNFs）的尺寸、形貌、表面电荷等进行表征，并探究药物负载和释放能力。<br>　　（2）采用柠檬酸钠还原法合成AuNPs，通过BSA修饰，制备电荷可反转的金纳米粒子（BSA-Au），对其粒径、形貌及不同pH下的表面电荷等进行表征。研究不同pH下BSA-Au和DNFs的相互作用，并对体外光热效应进行初步研究。<br>　　（3）将基于RCA构建的Dox-DNFs与BSA-Au相结合，采用共聚焦显微镜、细胞透射电镜等对Dox-DNFs@BSA-Au的主动、被动靶向识别能力进行表征。利用CCK-8实验、流式细胞术、活/死细胞染色实验等探究Dox-DNFs@BSA-Au对HeLa细胞的毒性作用。在小鼠体内建立HeLa细胞异体移植肿瘤模型，研究所构建的多功能核酸组装体在活体中的化疗/光热联合治疗效果。<br>　　结果：<br>　　（1）基于RCA反应制备得到具有褶皱、多孔结构的DNFs，粒径约为200nm。该材料实现了抗肿瘤药物Dox的有效负载，负载效率高达71.67%。且Dox-DNFs具有良好的稳定性，可在生理条件下稳定封装Dox，并在酸性pH下实现Dox的可控释放，16h内释放量可达78.69%。<br>　　（2）制备得到BSA-Au球形纳米粒子，粒径约为25nm，且具有良好的单分散性。实验测得所用BSA的等电点约为5.5。Zeta电位结果表明，当pH＜5.5时，BSA-Au带正电；当pH＞5.5时，BSA-Au带负电，因此BSA-Au具有电荷可反转的性质。当pH＜5.5时，带正电荷的BSA-Au可通过静电作用聚集在DNFs上。紫外-可见吸收光谱和Zeta电位结果表明，此时BSA-Au可在DNFs上发生聚集。体外光热实验结果表明，BSA-Au与DNFs相互作用后温度升高至46.1℃，且光热性能稳定。<br>　　（3）共聚焦显微镜成像结果表明，Dox-DNFs对HeLa细胞具有主动靶向识别能力，细胞透射电镜图显示BSA-Au可通过EPR（Enhancedpenetrationandretention）效应被动靶向进入HeLa细胞。细胞实验表明，所构建的Dox-DNFs@BSA-Au纳米组装体系可有效诱导HeLa细胞凋亡，CCK-8实验显示该体系处理后HeLa细胞的活性为43.26%，流式细胞实验表明该体系的细胞凋亡率为40.03%。进一步，将Dox-DNFs@BSA-Au用于小鼠异体移植宫颈癌模型的治疗，对小鼠体内肿瘤表现出明显的抑制作用，且治疗效果比单一化疗或光热治疗效果显著。此外，治疗过程中小鼠各主要脏器组织切片并未观察到明显损伤，表明Dox-DNFs@BSA-Au具有良好的生物安全性。<br>　　结论：<br>　　（1）基于等温扩增RCA技术DNA自组装得到含有HeLa细胞核酸适体的DNA纳米花型结构（DNFs），用于高效负载化疗药物Dox。<br>　　（2）制备了具有电荷可反转性质的BSA-Au，可通过静电吸附在DNFs上，在808nm激光照射下发挥光热效应。<br>　　（3）将用于药物靶向递送的Dox-DNFs与用于光热消融的BSA-Au相结合，构建多功能核酸组装体系（Dox-DNFs@BSA-Au），实现了对HeLa细胞的联合杀伤作用，显著抑制小鼠体内移植瘤的生长。