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摘要目的：<br>　　1、构建PNPLA3I148M及TM6SF2E167K双突变小鼠模型。<br>　　2、在动物水平探究PNPLA3I148M及TM6SF2E167K双突变引发肝脏脂肪变性的作用，揭示PNPLA3I148M和TM6SF2E167K位点双突变在调节肝脏脂质代谢中的联合作用。<br>　　方法：<br>　　1、PNPLA3I148M和TM6SF2E167K突变小鼠均来自于青岛大学附属青岛市市立医院肝病研究室，PNPLA3和TM6SF2杂合小鼠通过自交得到单突变纯合小鼠，PNPLA3单突变纯合小鼠和TM6SF2单突变纯合小鼠交配得到PNPLA3和TM6SF2的双突变杂合小鼠，通过双突变杂合小鼠自交最终得到PNPLA3和TM6SF2的双突变纯合小鼠。<br>　　2、选取8周龄成年雄鼠，将4种基因型小鼠随机分为12组（每组7只），分别为Wt-CD-0w组、Wt-CD-16w组、Wt-HFD-16w组、Pnpla3148I/ITm6sf2167K/K-CD-0w组、Pnpla3148I/ITm6sf2167K/K-CD-16w组、Pnpla3148I/ITm6sf2167K/K-HFD-16w组、Pnpla3148M/MTm6sf2167E/E-CD-0w组、Pnpla3148M/MTm6sf2167E/E-CD-16w组、Pnpla3148M/MTm6sf2167E/E-HFD-16w组、Pnpla3148M/MTm6sf2167K/K-CD-0w组、Pnpla3148M/MTm6sf2167K/K-CD-16w组和Pnpla3148M/MTm6sf2167K/K-HFD-16w组。每周固定时间称量并记录体重；实验周期结束时，取小鼠肝脏，称量并取部分肝组织做病理切片；检测口服葡萄糖耐量实验、空腹血浆血糖、血浆胰岛素水平等糖代谢指标；同时检测小鼠血浆甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL）等脂质代谢相关指标。<br>　　结果：<br>　　1、小鼠基因型检测结果证明，PNPLA3I148M及TM6SF2E167K双突变小鼠模型构建成功。<br>　　2、统计PNPLA3和TM6SF2双突变杂合小鼠交配得到不同基因小鼠的数量，Wt小鼠：PNPLA3单突变纯合小鼠：TM6SF2单突变纯合小鼠：杂合（Pnpla3148I/MTm6sf2167E/K、Pnpla3148I/MTm6sf2167E/E、Pnpla3148I/ITm6sf2167E/KPnpla3148M/MTm6sf2167E/K和Pnpla3148I/MTm6sf2167K/K）小鼠：Pnpla3148M/MTm6sf2167K/K小鼠的比例约等于1∶1∶1∶12∶1。<br>　　3、对小鼠生长发育影响：普通饮食条件下，四种不同基因型小鼠体重无明显差异（P＞0.05），高脂饮食诱导时，Pnpla3148M/MTm6sf2167K/K小鼠12周和16周体重均高于Wt小鼠（P＜0.05）。高脂饮食喂养16w时，Pnpla3148M/MTm6sf2167K/K小鼠肝指数和肝重高于其他三种基因型小鼠（P＜0.05）。<br>　　4、对小鼠葡萄糖代谢影响：普通饮食喂养16w时，Pnpla3148M/MTm6sf2167K/K小鼠的空腹血浆血糖水平高于其他三种基因型小鼠（P＜0.05），血浆胰岛素水平低于其他三种基因型小鼠（P＜0.05）；高脂饮食喂养16w时，Pnpla3148M/MTm6sf2167K/K小鼠的空腹血浆血糖、OGTT-2h血糖、胰岛素抵抗和OGTT-AUC都显著高于Wt小鼠（P＜0.05），血浆胰岛素水平低于Wt小鼠（P＜0.001）。<br>　　5、对小鼠肝脏脂质代谢影响：高脂饮食喂养16w时，Pnpla3148M/MTm6sf2167K/K小鼠血浆TG水平低于其他三种基因型小鼠（P＜0.05），血浆TC水平高于Wt小鼠和TM6SF2单突变小鼠（P＜0.05）；Pnpla3148M/MTm6sf2167K/K小鼠血浆ALT水平高于Wt小鼠（P＜0.05）；Pnpla3148M/MTm6sf2167K/K小鼠的血浆LDL水平高于其他三种基因型小鼠（vs.Wt小鼠P＜0.01；vs.TM6SF2单突变小鼠P＜0.01；vs.PNPLA3单突变小鼠P＜0.05）；Pnpla3148M/MTm6sf2167K/K小鼠的血浆HDL水平高于PNPLA3单突变小鼠和Wt鼠（vs.PNPLA3单突变小鼠P＜0.01;vs.Wt小鼠P＜0.05）；Pnpla3148M/MTm6sf2167K/K小鼠肝脏TG含量明显高于其他三种基因型小鼠（vsWt小鼠P＜0.0001；vsTM6SF2单突变小鼠P＜0.001；vsPNPLA3单突变小鼠P＜0.01）。HE染色和油红O染色结果表明，Pnpla3148M/MTm6sf2167K/K小鼠较其他三种基因型小鼠发生更严重的脂肪变性。<br>　　结论:<br>　　1、PNPLA3I148M及TM6SF2E167K双突变小鼠模型构建成功。<br>　　2、PNPLA3I148M和TM6SF2E167K双突变在普通饮食和高脂饮食情况下均导致小鼠发生葡萄糖代谢异常。<br>　　3、PNPLA3I148M及TM6SF2E167K双突变在高脂饮食情况下对小鼠肝脏脂质沉积产生叠加效应，加速NAFLD的进展。