检索历史 清除

摘要背景：<br>　　在全球癌症报告中，结肠癌的发病率和死亡率分别位居第三和第二位，治疗结肠癌成为医疗工作者的当下要务。虽然现有抗癌药物种类较多，但普遍存在毒副作用强，易耐药的特点，所以研发出更高疗效，更低毒的新型抗结肠癌的药物是急需解决的一个医疗问题。由于微管在有丝分裂中的重要作用，微管蛋白抑制剂已经成为一种有效的抗肿瘤药物，被广泛研究。<br>　　目的：<br>　　本课题选用新型微管蛋白抑制剂TH320为实验药物，探究其对结肠癌HT-29细胞的抑制增殖作用以及机制。<br>　　方法：<br>　　采用MTT法筛选出对TH320最敏感的肿瘤细胞，并研究其生长抑制作用规律，选择最佳浓度及最适时间用于机制探究。倒置荧光显微镜观察并拍照记录经过TH320处理后HT-29细胞形态变化，并且用Hoechst33342染料染色观察细胞核变化，采用C11BODIPY，DCFH-DA和DHE染色观察活性氧和脂质过氧化变化。同时使用流式细胞仪检测HT-29细胞经TH320诱导后的活性氧，脂质过氧化，自噬，凋亡，周期变化情况。通过Western blot实验从蛋白水平验证TH320对HT-29细胞内自噬相关蛋白(ATG5，ATG7，LC3)的表达以及周期相关蛋白（CyclinB1，CDK1，p-H3）的表达。通过脂质氧化检测试剂盒，总谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒，组织铁测定试剂盒，GSSG和GSH检测试剂盒，分别对丙二醛，总谷胱甘肽过氧化物酶活力，游离铁，GSSG和GSH含量进行检测。通过加入铁死亡抑制剂，自噬抑制剂，CDK抑制剂以探讨铁死亡，自噬以及周期阻滞之间的关系。<br>　　结果：<br>　　1.TH320对多种肿瘤细胞具有毒性作用，其中对HT-29细胞的细胞毒性作用最为明显，且强于CA-4。<br>　　2.TH320对HT-29细胞的毒性作用呈时间剂量依赖性。<br>　　3.TH320引起HT-29细胞发生铁死亡，而不是凋亡。<br>　　4.TH320引起HT-29细胞内发生脂质过氧化即活性氧含量以及过氧化脂质含量升高，丙二醛含量升高以及总谷胱甘肽过氧化物酶活力降低，谷胱甘肽总含量降低。<br>　　5.TH320诱导HT-29细胞发生自噬。<br>　　6.TH320呈时间剂量依赖性地诱导HT-29细胞发生G2/M期周期阻滞。<br>　　7.铁死亡抑制剂能逆转TH320对HT-29细胞的生长抑制，铁死亡，以及周期阻滞，但对TH320诱导HT-29细胞发生的自噬影响无法判断。<br>　　8.自噬抑制剂能抑制TH320诱导HT-29细胞发生的自噬，但不能逆转TH320对HT-29细胞的生长抑制，铁死亡以及周期阻滞。<br>　　9.CDK抑制剂能逆转TH320对HT-29细胞的生长抑制，铁死亡，以及周期阻滞，但无法确定对TH320诱导HT-29细胞发生的自噬的影响。<br>　　结论：<br>　　新型微管蛋白抑制剂TH320对人结肠癌HT-29细胞具有毒性作用，且呈时间剂量依赖性。在TH320诱导HT-29细胞死亡过程中，自噬，铁死亡，周期阻滞均参与其中；且周期阻滞与铁死亡有密切的联系，自噬与周期阻滞和铁死亡二者的关系有待进一步探究。