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摘要卵巢早衰（Prematureovarianfailure，POF）指女性在40岁之前，卵巢中卵泡储备耗竭，卵巢功能衰退的一种疾病。近年来，POF的发病年龄逐年降低，发病率持续上升，目前尚无有效的治疗手段。4-乙烯基-1-环己烯二环氧化物（4-vinylcyclohexenediepoxide，VCD）是工业生产中产生的一种环境污染物。研究显示，VCD可诱导卵巢中原始卵泡和初级卵泡数量显著下降，从而造成卵巢早衰。因此，VCD常被用于诱导卵巢早衰动物模型的建立，但是VCD靶向卵巢中的原始和初级卵泡造成其数量下降的机理尚不明确。<br>　　脐带间充质干细胞（Umbilicalcordmesenchymalstemcells，UCMSCs）是来源于新生儿脐带组织中的一种干细胞，研究发现UCMSCs对卵巢早衰有一定的治疗作用，但其具体治疗机制尚不清楚。胰岛素样生长因子受体1（Insulin-likegrowthfactor1receptor，IGF1R）是一种受体酪氨酸激酶，IGF1R/Akt/mTOR信号通路与哺乳动物的原始卵泡和初级卵泡发育密切相关。但IGF1R是否是VCD影响卵巢中原始卵泡和初级卵泡发育的靶点，以及UCMSCs对卵巢早衰的治疗作用是否与IGF1R相关尚有待进一步研究。<br>　　本研究通过腹腔注射VCD诱导建立POF小鼠模型，并利用UCMSCs治疗POF小鼠，通过检测卵巢内IGF1R的表达变化，颗粒细胞增殖和抗凋亡，激素分泌等颗粒细胞功能，以及IGF1R/Akt/mTOR通路激活情况，研究UCMSCs治疗POF的分子机制，为临床应用UCMSCs治疗POF提供理论依据。<br>　　主要研究结果如下：<br>　　（1）连续15天腹腔注射VCD，可以诱导小鼠出现发情周期紊乱，卵巢内卵泡数量显著下降及外周血雌激素显著下降等卵巢早衰症状，对小鼠体重等无显著影响；在15天建模期间小鼠卵巢中的原始卵泡，初级卵泡和有腔卵泡数量显著减少，卵巢中IGF1R的表达量随注射天数而降低。结果表明，连续15天腹腔注射VCD可以成功构建小鼠卵巢早衰模型。<br>　　（2）500μMVCD处理人卵巢颗粒细胞（KGN）细胞24h后，显著增加KGN细胞凋亡比例，引起的细胞周期分布紊乱同时促进了KGN细胞的自噬；WesternBlotting结果表明VCD下调KGN细胞中IGF1R的表达水平，抑制mTOR和Akt磷酸化水平，进而发挥对KGN细胞的毒性作用。<br>　　（3）利用脐带组织块法培养法分离UCMSCs，UCMSCs呈成纤维样，梭形，生长增殖正常；所分离的UCMSCs表达间充质干细胞的阳性标记物CD105和CD90，而不表达CD34、CD45以及HLA-DR；此外，所分离的UCMSCs具有成脂、成骨及成软骨三系分化能力。采用超速离心法提取UCMSCs来源外泌体（UCMSCs-EXOs），透射电镜下UCMSCs-EXOs呈现典型的杯状或盘状囊泡，直径在100-120nm，纳米粒子跟踪分析显示检测悬液中原始颗粒浓度为1.24×109个/mL，WesternBlotting结果进一步确认UCMSCs-EXOs表达CD9、CD63以及TSG101表面标志蛋白，符合UCMSCs-EXOs鉴定标准；此外，外泌体测序结果显示外泌体含有丰富的miRNA。<br>　　（4）卵巢早衰小鼠尾静脉注射UCMSCs后，与未治疗组小鼠相比，UCMSCs组小鼠发情周期恢复正常，卵巢中各级卵泡数量显著上升，卵巢中凋亡细胞数量减少，外周血雌激素水平显著上升，同时，卵巢中IGF1R表达水平上升；结果表明UCMSCs可以改善由VCD造成的卵巢功能损害，减少颗粒细胞凋亡，恢复IGF1R表达水平，挽救卵巢储备。<br>　　（5）UCMSCs-EXOs体外培养卵巢结果表明，UCMSCs-EXO增强卵泡对VCD的抵抗力，促进了原始卵泡的生长；UCMSCs-EXOs与VCD共处理KGN细胞24h后，显著恢复了VCD导致的细胞活力下降，改善了VCD引起的细胞周期分布紊乱，同时减少了VCD造成的细胞凋亡；WesternBlotting结果表明UCMSCs-EXOs上调KGN细胞中IGF1R的表达水平，促进Akt及mTOR磷酸化水平，进而实现对KGN细胞的保护作用。