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补肾活血通络法调控KOA大鼠关节软骨细胞HSP70/90和IL-1β表达的实验研究

摘要目的:在“肾虚血瘀络痹”的中医理论指导下,总结导师临床辨证论治膝骨关节炎经验,以“补肾活血通络”立法组方,拟定出以鹿角、牛膝、白芍等为主要药物组成的中药复方制剂。通过动物实验,初步验证补肾活血通络法,对前交叉韧带离断致大鼠KOA膝关节软骨组织有一定的保护作用;初步验证补肾活血通络法中药复方制剂,对KOA大鼠膝关节软骨细胞中热休克蛋白HSP70、HSP90和白细胞介素IL-1β的表达有一定的影响。<br>  材料与方法:釆用随机数字表法,将50只SPF级SD大鼠(体重范围是180-220g)平均分入5组(正常组即假手术组,模型组,补肾活血通络法中药复方制剂低剂量组、中剂量组、高剂量组)。采用前交叉韧带离断的手术方法,建立大鼠膝骨关节炎模型。造模后,给药,每日2次,8周。假手术组和模型组的灌胃给药为生理盐水(0.9%Nacl溶液),其余实验组的灌胃给药为低、中、高剂量的补肾活血通络法中药复方制剂。各组实验动物在末次给药后的第2日,麻醉处死并取材,将取得的各组大鼠造模侧膝关节标本,经组织固定,脱钙,蒸馏水浸泡,常规脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、保存,HE染色。采用免疫组织化学技术,检测各组标本中软骨细胞的HSP70、HSP90和IL-1β表达的阳性细胞数和平均吸光度值。用SPSS12.0统计学软件进行数据统计分析。<br>  结果:<br>  1.与正常组相比、模型组膝关节软骨病理缺损程度增加,IL-1β的表达上调,说明本次实验前交叉韧带离断致鼠KOA造模成功。<br>  2.与正常组相比,模型组膝关节标本出现早中期OA样改变,软骨病理缺损程度增加;与模型组相比,补肾活血通络法中药复方制剂的低、中、高剂量组,关节软骨的破坏情况均有不同程度的改善。<br>  3.在正常组中,有明显的HSP70和HSP90阳性细胞,无明显的IL-1β阳性细胞,在模型组中,HSP70和HSP90的表达下调,IL-1β的表达上调;与正常组相比,模型组的HSP70和HSP90的阳性细胞数减少及吸光度降低,差异有统计学意义(P<0.05),IL-1β的阳性细胞数增加及吸光度升高,差异有统计学意义(P<0.05)。<br>  4.与模型组相比,在补肾活血通络法中药复方制剂低、中、高剂量组中,HSP70和HSP90的表达上调,IL-1β的表达下调;高剂量组在HSP70、HSP90和IL-1β的阳性细胞数和吸光度方面,差异有统计学意义(P<0.05)。<br>  结论:<br>  1.在膝关节标本的病理形态学评价方面,本次动物实验的造模方法成功,补肾活血通络法中药复方制剂对前交叉韧带离断致大鼠膝关节炎具有一定的保护作用。<br>  2.从膝关节标本的免疫组织化学结果看,补肾活血通络法中药复方制剂可上调软骨细胞中HSP70和HSP90的相应表达,可下调软骨细胞中IL-1β的相应表达,BSHX高剂量组效果显著。<br>  3.补肾活血通络法能通过调控KOA大鼠膝关节软骨细胞中HSP70、HSP90和IL-1β的表达,在一定程度上提高KOA大鼠抗应激和抗炎症反应的能力,进而对膝关节软骨组织起到一定的保护作用。

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