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摘要研究目的：<br>　　肺癌是一种在全世界发病率居高不下的恶性肿瘤，多年以来使人类蒙受巨大的损失。在全部的肺癌患者人群中，非小细胞肺癌的比例达到了85%左右。肺癌的诊疗手段，包括手术治疗、放疗、化疗、免疫治疗等，然而诸多方法中，化疗一直是治疗肺癌的一线治疗方法。可是化疗容易导致耐药性的出现，开发新的化疗药物是临床主要需求之一。<br>　　去亚甲基小檗碱（Demethyleneberberine，DMB）是清热药物黄柏的提取物，已有报道去亚甲基小檗碱有抑制结肠癌的活性，可以抗氧化抗炎，其抗肺癌的作用和机制还尚不明确。本课题组前期研究发现，去亚甲基小檗碱能够通过促进细胞衰老抑制肺癌细胞增殖，但是其在体内是否具有抗肺癌作用，以及具体的机制，则尚不明确。本文旨在通过体内外实验，研究去亚甲基小檗碱的抗肺癌作用及机制，为去亚甲基小檗碱的应用提供实验依据。<br>　　方法：<br>　　1．建立荷瘤小鼠模型，体内实验检测DMB是否具有抗肿瘤作用；<br>　　2．Transwell实验检测DMB对肺癌细胞迁移能力的影响；<br>　　3．RT-PCR实验检测DMB是否通过上皮间质转化抑制肺癌细胞迁移；<br>　　4．流式细胞术检测DMB对肺癌细胞凋亡的影响；<br>　　5．RNA-seq分析检测DMB处理后的差异基因表达，并对差异表达基因进行生物信息学分析，包括GO基因本体分析，KEGG通路分析，GSEA分析等，研究其抗肺癌机制。6．对RNA-seq的结果进一步进行实验验证，包括基因敲减、过表达实验、RT-qPCR实验，westernblot等。<br>　　结果：<br>　　1.动物实验：与对照组相比，DMB能够显著抑制肿瘤生长(P＜0.05)。组织病理学分析显示DMB能导致肿瘤细胞死亡，毒性检查发现肾脏和肝脏中并没有毒性。<br>　　2.Transwell实验：与对照组相比，DMB实验组A549和NCI-H1299细胞的迁移率显著降低(P＜0.05)。<br>　　3.RT-PCR实验：与对照组相比，DMB实验组A549和NCI-H1299细胞EMT相关基因Snail、Vimentin和ZEB-1显著下调(P＜0.05)。<br>　　4.流式细胞术：与对照组相比，DMB实验组A549和NCI-H1299细胞的凋亡率显著上升(P＜0.05)；<br>　　5.RNA-seq分析：与对照组相比，DMB组中的基因主要富集在HIF-1α通路上。<br>　　6．实验验证结果:与对照组相比，DMB处理后HIF-1α显著下调(P＜0.05)，成功转染HIF-1α过表达的细胞株，和siRNA转染获得瞬时表达沉默HIF-1α的细胞株，发现DMB能够通过下调HIF-1α相关途径抑制肺癌细胞活性。同时发现，HIF-1α过表达减缓了DMB对肺癌细胞增殖的抑制。<br>　　7．DMB能够下调HIF-1α上游基因c-Myc的表达，DMB处理小鼠肿瘤组织中c-Myc/HIF-1α表达也下调。<br>　　结论：<br>　　1．DMB可以在体内抑制肺癌的生长，且对其他部位没有毒性作用。<br>　　2．DMB能够通过上皮间质转化来抑制肺癌细胞的迁移，且能够促进肺癌细胞凋亡。<br>　　3．DMB可能通过调控c-Myc/HIF-1α通路来发挥抗肺癌的作用。