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摘要目的：多巴胺(Dopaminergic,DA)神经元分化的潜在机制尚未完全阐明。本研究试图分析小鼠上胚层干细胞(Epiblast stem cells,EpiSCs)产生的外泌体中microRNA(miRNA)和mRNA的表达情况，揭示外泌体在DA神经元命运决定中的作用。<br>　　方法：EpiSCs在添加了SHH和FGF8的N2B27培养基中增殖，通过单层分化(Monolayer differentiation,MD)的方法建立起DA神经元分化模型，分别在MD0，2，4，6，8，10，12，14天从细胞培养上清液中分离、纯化外泌体，分析其中miRNAs、mRNAs的动态表达情况，针对差异表达的miRNAs，运用DIANA-mirPath方法进一步分析下游的靶基因和作用通路。此外，将EpiSCs分化过程中产生的外泌体与小鼠胚胎干细胞(Embryonic stem cells,ESCs)共孵育，分析ESCs的DA神经元分化效率。<br>　　结果：在DA神经元分化的第0、2、4、6、8、10、12和14天，26个miRNAs在外泌体中差异表达(相对倍数＞2，p＜0.05)。其中，miR-124、miR-132、miR-133b、miR-218、miR-9、miR34b、miR-34c和miR-135a2等23个外泌体miRNAs与对照相比表达显著增加，而miR-214、miR-7a和miR-302b这3个miRNAs表达显著减少。DIANA-mirPath生物信息学分析表明，DA分化相关的miRNAs主要集中在细胞外基质-受体相互作用、干细胞多能性调节信号通路、FoxO信号通路、DA突触、Wnt信号通路、GABA能突触以及神经营养因子信号通路(p值均＜0.012)。随着时间的推移，9种DA神经元标志物——酪氨酸羟化酶(Tyrosine hydroxylase,TH)、Nr4a2、Pitx3、Drd1a、Lmx1a、Lmx1b、Foxa1、Dmrt5和Slc18a2的mRNAs在EpiSCs来源外泌体中表达显著增加。更重要的是，在小鼠ESCs向DA神经元分化的过程中，加入EpiSC诱导分化实验中的外泌体，可使TH阳性神经元的产量增加两倍(35%vs.17%，p＜0.01)。<br>　　结论：在EpiSC向DA神经元分化过程中，外泌体特定miRNAs和mRNAs的表达随时间而动态变化，并发挥对DA神经元分化的潜在调节作用。EpiSC来源的外泌体可在体外促进ESCs向DA神经元分化。