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摘要年龄相关性黄斑变性（AMD）是导致老年人视力下降的主要原因，自1941年起碘酸钠始终被广泛应用于建立视网膜变性细胞模型或动物模型，但其损伤视网膜的机制尚不清楚。本研究通过碘酸钠损伤视网膜色素上皮（RPE）细胞建立RPE细胞变性模型，发现碘酸钠诱导RPE细胞内的活性氧（ROS）、游离铁水平增加，促进脂质过氧化，耗竭谷胱甘肽，这些现象与铁死亡的特征一致。进一步研究发现鞘脂从头合成抑制剂多球壳菌素（myriocin）可以缓解碘酸钠诱导的氧化应激和胞内铁池紊乱。<br>　　本研究分为两个部分：<br>　　（1）碘酸钠触发RPE细胞铁死亡<br>　　通过细胞计数、乳酸脱氢酶（LDH）检测、细胞结构显微观察、ROS染色、JC-1染色等方法，发现碘酸钠损伤导致RPE细胞存活率降低、LDH泄漏、显微形态结构破坏、ROS水平升高、线粒体膜电位（MMP）降低。通过凋亡抑制剂作用发现凋亡抑制并不能阻止碘酸钠损伤的RPE细胞死亡，在AnnexinV-FITC/PI染色、Hoechst33342/PI染色、TUNEL染色中均只有很少量的细胞或无细胞凋亡，说明碘酸钠损伤的RPE细胞死亡的主要原因并非凋亡；本研究发现坏死诱导剂TNFα不能诱导RPE细胞死亡，坏死抑制剂Nec-1和GSK''872可保护RPE细胞，但坏死抑制剂NSA不能保护RPE细胞，碘酸钠损伤的RPE细胞PI染色强阳性，WesternBlot发现坏死蛋白RIPK1、RIPK3和MLKL没有被磷酸化，以上数据表明碘酸钠损伤的RPE细胞并非主要死于坏死性凋亡；β-半乳糖苷酶染色阴性、自噬抑制剂不能阻止碘酸钠损伤的RPE细胞死亡、WesternBlot和ELISA显示IL1β阴性等数据，说明碘酸钠损伤的RPE细胞并非主要死于衰老和自噬，同时也不过多的分泌炎性因子。<br>　　本研究发现，铁死亡抑制剂Fer-1、DFO及PIH均可提高碘酸钠损伤的ARPE-19细胞及小鼠原代RPE细胞的存活率，加入外源铁Heme会增加ARPE-19细胞对碘酸钠的敏感性，表明碘酸钠作用与RPE细胞内的游离铁水平有关。calcein荧光淬灭实验显示碘酸钠以时间依赖性或浓度依赖性的方式增加RPE细胞内游离铁水平，同时发现碘酸钠显著降低了RPE细胞内还原型谷胱甘肽（GSH）和半胱氨酸（Cys）的水平，通过荧光探针发现碘酸钠浓度依赖性的增加RPE细胞内的脂质过氧化及丙二醛（MDA）水平。这些变化与铁死亡的特征一致，表明碘酸钠诱导了RPE细胞铁死亡。<br>　　qPCR、WesternBlot、calcein荧光淬灭和荧光逆转实验及细胞外实验等发现碘酸钠并没有改变RPE细胞的铁转运、也不会导致铁蛋白释放铁离子。紫外吸收检测显示碘酸钠作用后RPE细胞内含铁硫簇的顺乌头酸酶的活性显著降低，表明碘酸钠损伤的RPE细胞内多余的游离铁来自于含Fe-S簇的蛋白质。<br>　　（2）Myriocin抑制碘酸钠诱导的RPE细胞铁死亡<br>　　通过CCK实验得知0.1nM~10μMmyriocin可保护RPE细胞，其保护作用的最佳时间为3d。通过回补DHS和Ceramide证实myriocin通过抑制鞘脂的从头合成途径保护RPE细胞。通过扫描电镜、Hoechst33342/PI染色、AnnexinV-FITC/PI染色、坏死抑制剂等发现myriocin可抑制碘酸钠诱导的RPE细胞铁死亡，其作用显著强于Fer-1、DFO等铁死亡抑制剂。LDH检测发现myriocin抑制RPE细胞LDH的泄露。通过FTY720的作用显示myriocin对RPE细胞的保护作用与1-磷酸鞘氨醇受体信号通路无关。通过calcein荧光淬灭法、添加外源铁heme及ferritin的WesternBlot等实验，得知myriocin可以维持RPE细胞内铁池稳定，抑制碘酸钠诱导的RPE细胞铁死亡。通过荧光探针DCFH-DA、BODIPY581/591C11、JC-1标记和GSH检测等实验发现myriocin参与RPE细胞内氧化还原平衡的调节。通过高通量转录组测序分析，发现myriocin处理68h显著提高了细胞氧化应激相关基因的表达，参与病毒感染、细胞死亡、肿瘤、细胞骨架等信号通路的调控。进一步研究发现myriocin主要通过抑制鞘脂合成缓解氧化应激，提高RPE细胞铁死亡抗性。<br>　　总之，碘酸钠主要通过诱导细胞游离铁水平提高、ROS积累、脂质过氧化、GSH和Cys耗竭、LDH泄露、线粒体膜电位下降，导致细胞发生铁死亡。碘酸钠作为构建AMD模型的常用试剂，提示AMD与铁死亡相关，揭示碘酸钠是一种新型的铁死亡诱导剂。此外，myriocin通过抑制鞘脂合成缓解碘酸钠诱导的氧化应激、维持胞内铁池稳定、提升细胞存活率，说明鞘脂代谢参与了AMD的发病进程。本研究为AMD等年龄相关性疾病的发病机理提供了新的思路，而myriocin也有望作为一种新的铁死亡抑制剂参与其它与铁死亡相关疾病的研究和治疗过程。