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摘要诃子为使君子科植物诃子（Terminalia chebula Retz., T. Chebula）的干燥果实，在我国药用历史悠久，收存于多种古方典籍中，用于多种症候的改善。现代药理学研究揭示诃子在抗肿瘤、抗炎镇痛等方面具有显著活性。课题组前期对40种常见藏药的抗氧化活性进行了筛选评价，结果发现诃子表现出极强的抗氧化活性。由于阿尔兹海默症的发生与发展，同机体氧化应激稳态息息相关，因此课题组前期利用秀丽隐杆线虫模型开展了大量的诃子抗AD活性研究，结果显示诃子及含诃子的复方八味沉香丸可通过调控daf-16核转位，调控下游DAF-16和Hsp16.2表达，改善Aβ1-42诱导的毒性，降低线虫中Aβ1-42寡聚物水平，发挥其抗AD活性。AD转基因秀丽隐杆线虫模型通过将人源Aβ1-42基因整合在线虫组织中，产生Aβ病理。由于秀丽隐杆线虫中淀粉样前体蛋白APP的同源物APL-1不含Aβ序列，并且不具有Aβ剪切中关键酶β-剪切酶的活性，因此秀丽隐杆线虫模型更多的应用于筛选改善Aβ诱导毒性的药物中，难以深入研究药物对Aβ产生以及降解中的作用。因此，本课题在前期研究工作的基础上，开展了诃子对外源性Aβ诱导的SH-SY5Y细胞氧化损伤的改善，同时，深入地研究了APPswe转基因细胞中，诃子对Aβ产生过程中α/β/γ-剪切酶活性、以及对Aβ降解作用的影响，较为全面地阐明了诃子抗AD的活性及机制；同时也研究了诃子发挥抗AD活性的物质基础。工作的主要研究内容和研究结果如下：<br>　　研究发现诃子对外源 AβO 诱导的人源神经母细胞瘤细胞 SH-SY5Y 氧化损伤具有改善作用。本文首先建立了Aβ1-42的寡聚物诱导的SH-SY5Y细胞氧化损伤模型。AβO作用24 h后，细胞质内Ca2+异常升高（与空白组相比升高了62.8%），细胞ATP合成受阻（与空白组相比下降33.2%），细胞ROS水平上调，线粒体膜电位去极化，同时发生Cyt C / Caspase-3依赖的细胞凋亡。在40μg/mL诃子水提液（TWE）给药后，Ca2+水平下调30.4%，ATP水平上调33.0%，ROS水平异常升高和MMP去极化现象被逆转，且Cyt C/Caspase-3依赖的细胞凋亡水平降低8.23%，有效改善了由AβO诱导的Ca2+异常代谢以及线粒体代谢紊乱。APPsweamp;nbsp;转基因细胞中的研究指出，10、40、80μg/mL诃子水提液作用后，细胞外Aβ1-40和Aβ1-42呈现出诃子水提液浓度和时间依赖的下降；其中，80μg/mL TWE作用转基因细胞24 h和48 h后，胞外Aβ1-40的水平下降39.6%和42.8%，Aβ1-42分别降低36.0%和50.7%；α-剪切酶（ADAM10）表达升高1.37倍，β-剪切酶（BACE1）表达降低2.1倍，γ-剪切酶（PS1）表达下调1.24倍，sAPPα水平上升4.93倍， sAPPβ水平降低1.21倍，表明诃子水提液抑制APP蛋白的淀粉样代谢途径、促进非淀粉样代谢途径。此外，TWE可上调转基因细胞自噬活性，自噬抑制剂CQ阻断自噬后，细胞外Aβ1-42的水平上升1.27，ADAM10水平上升1.41倍，BACE1水平上升1.23倍，sAPPα水平上升1.72倍，sAPPβ水平上升1.17倍，表明TWE诱导的自噬抑制APP蛋白的淀粉样途径，抑制胞外Aβ1-42积累。<br>　　通过对水提液进行萃取并考察各萃取相的活性，结合UPLC-MS/MS等分离，显示TWE中主要成分诃子酸（CN）可能是其发挥抗AD作用的重要物质基础。实验证实，在 10 μM CN 处理 APPswe 转基因细胞后，细胞外 Aβ1-40水平下降14.8%，细胞外Aβ1-42水平下降42.7%。该过程中，ADAM10表达升高1.23倍， BACE1表达降低2.3倍，PS1表达下调1.66倍，sAPPα水平上升2.61倍，sAPPβ水平降低4.35倍，同时，BACE1酶活性降低1.15倍，表明CN抑制BACE1活性，调控APP代谢途径向非淀粉样代谢途径转变而实现。同TWE一致，CN诱导转基因细胞自噬，CQ阻断自噬后，细胞外Aβ1-42的水平上升1.52倍，ADAM10、BACE1、sAPPβ水平无显著变化，sAPPα水平上升1.48倍，表明TWE诱导的自噬加速APP蛋白的非淀粉样途径，下调胞外Aβ1-42水平。此外，CN还能够改善外源性Aβ诱导的氧化损伤；结果指出，20μM CN处理SH-SY5Y细胞后，阻断AβO诱导的损伤，具体表现为细胞质Ca2+水平下调32.8%，细胞ATP水平上调27.0%，线粒体ROS异常升高和MMP去极化现象逆转，Cyt C/Caspase-3依赖的细胞凋亡水平降低6.5%，表明CN可以改善AβO诱导的SH-SY5Y细胞中Ca2+异常代谢，以及线粒体代谢紊乱。<br>　　综上所述，本论文深入探讨了诃子的抗AD活性，并对其主要成分诃子酸的抗AD活性进行了研究。结果表明诃子和诃子酸能够有效改善外源AβO诱导的SH-SY5Y细胞中Ca2+异常代谢和线粒体代谢紊乱，并通过调控SH-SY5Y/APPsweamp;nbsp;细胞中APP的剪切酶活性，增强其非淀粉样代谢途径，抑制Aβ生成；同时，诱导细胞自噬增强Aβ降解。上述结果可为抗AD药物开发和深入挖掘民族药的现代药用价值提供参考数据。