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摘要目的：<br>　　吸入性肺损伤是火灾事故导致人员伤亡的主要原因之一，烧伤患者如果合并有吸入性肺损伤其病死率可达60％。尽管在药物治疗方面已开展了大量研究，但安全有效的治疗方案仍然十分有限，导致烟雾吸入性损伤的病死率仍居高不下。依达拉奉作为一种强效自由基清除剂，在神经系统疾病治疗方面已有良好临床应用基础；地塞米松作为临床常用的抗炎药，在多种原因引起的炎症反应中已得到广泛应用。既往研究表明，二者在损伤修复方面可能存在一定的协同作用。然而，二者联用治疗烟雾吸入性肺损伤的相关研究尚未见报道。因此，本研究通过建立烟雾吸入性肺损伤大鼠模型，研究依达拉奉与地塞米松联用对烟雾吸入性肺损伤的治疗效果并探讨线粒体途径的细胞凋亡机制在药物治疗中的作用，为后续开展相关临床研究提供基础。<br>　　材料和方法：<br>　　1.烟雾吸入性肺损伤模型的建立与评价：将60只SD大鼠随机分为6组，即空白对照组、染毒后1h组、染毒后6h组、染毒后24h组、染毒后48h组、染毒后96h组。每10只动物一组，雌雄各半。实验过程中，染毒组在产烟浓度为25mg/L的条件下连续染毒30min，空白对照组动物置于空气中的时间与染毒组一致，染毒组动物在染毒结束后1h、6h、24h、48h、96h腹腔注射戊巴比妥钠（50ml/kg）麻醉后进行解剖观察并取材。打开腹腔后暴露腹主动脉，抽取1ml血液，于30min内进行血气分析；收集实验动物的支气管肺泡灌洗液（BALF），酶联免疫吸附测定（ELISA法）检测BALF中白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-8（IL-8）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）浓度，二辛可宁酸（BCA）法检测BALF中总蛋白（TP）含量；取左肺行苏木精-伊红染色（HE）后作病理学检查；取右肺下叶测肺湿干比（W/D），右肺剩余部分组织匀浆后ELISA法检测肺组织IL-6、IL-8、TNF-α、丙二醛（MDA）、髓过氧化物酶（MPO）的浓度变化。<br>　　2.药效学研究：使用SD大鼠50只，随机分为5组，即空白对照组（C组）、染毒对照组（M组）、依达拉奉组（E组）、地塞米松组（D组）、联合用药组（ED组），每10只动物一组，雌雄各半。在产烟浓度为25mg/L的条件下连续染毒30min，存活动物1h后给予药物进行干预治疗。其中，E组动物5mg/kg给药剂量腹腔注射依达拉奉；D组动物5mg/kg给药剂量腹腔注射地塞米松；ED组动物依达拉奉和地塞米松给药剂量保持不变，同时腹腔注射。所有给药动物24h后进行解剖检查。使用傅里叶变换红外（FTIR）烟气分析仪检测染毒过程中的烟气成分及浓度；使用小动物无创肺功能检测系统进行肺功能检测；使用与第一部分相同的方法进行腹主动脉采血并进行血气分析；收集右肺BALF检测TP、TNF-α、IL-6、IL-8；取左肺HE染色后作病理学检查；取右肺下叶测W/D值，右肺剩余部分组织匀浆后ELISA法测定肺组织IL-6、IL-8、TNF-α、MDA、MPO、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽（GSH）浓度。<br>　　3.作用机制研究：动物建模与给药同药效学研究部分，解剖后取右肺除下叶外的剩余部分，提取肺泡细胞后流式细胞术检测活性氧（ROS）及线粒体膜电位（MMP）的变化情况；采用荧光酶标仪检测线粒体通透性转换孔（MPTP）变化情况；使用WesternBlot（WB）法检测细胞色素C（Cyt-c）、凋亡诱导因子（AIF）、第二个线粒体来源的胱氨酸酶激活剂（Smac）、cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-9、cleaved-PARP的相对表达；脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡。<br>　　结果：<br>　　1.烟雾吸入性肺损伤模型的建立与评价：染毒结束后各染毒组动物可见明显的呼吸困难，呼吸急促，部分动物可听见哮鸣音，30min后症状好转，但仍不喜动，被毛杂乱，30min观察期内所有动物均无死亡。之后正常饲养，期间对动物进行观察可见，染毒后24h、48h、96h组动物形态消瘦、被毛不光滑，其中染毒后48h组3只动物死亡，染毒后96h组2只动物死亡，解剖发现肺部淤血、胃肠胀气。存活动物解剖后肉眼检查可见染毒后24h和48h组，肺组织明显肿大、淤血；血气分析可见，染毒后1h组动物血液氢离子浓度指数（pH值）、氧分压（PaO2）、氧饱和度（sO2）明显降低，二氧化碳分压（PaCO2）明显升高；肺组织病理学检查可见动物染毒后即可出现一定的病理损伤，随着时间的进展损伤逐渐加重，至48h损伤最严重，96h病理损伤可见一定程度的恢复。镜下可见支气管或血管周围结缔组织疏松，内含水肿液，肺泡上皮细胞不同程度增生，肺泡腔或水肿间质内可见炎细胞浸润等；肺组织W/D值测定可见，染毒后24h肺组织W/D值即可显著升高，48h后最明显；检测肺组织中IL-6、IL-8、TNF-α发现，染毒后24h组以上3个指标均明显升高；检测肺组织MDA、MPO发现，染毒后1h、6h组动物肺组织中MDA浓度明显升高，染毒后1h、6h、24h组肺组织中MPO浓度明显高；BALF中总蛋白（TP）检测可见，暴露后24h大鼠BALF中TP浓度明显升高。<br>　　2.药效学研究：烟气成分分析显示聚氯乙烯（PVC）热解烟气的主要成分有二氧化碳（CO2,6314.1ppm）、一氧化碳（CO,922.8ppm）和氯化氢（HCl,7879.4ppm）。此外，还有少量刺激性气体如丙烯醛、氮氧化物（NOx）、二氧化硫（SO2）等。染毒后，肺功能检测可见大鼠的呼吸频率（f）、潮气量（TV）、分钟通气量（MV）明显降低，吸气时间（Ti）和呼气时间（Te）明显增加，给药后呼吸功能的异常改变有不同程度的恢复，其中D组及ED组较明显。同时，给药后可见大鼠动脉血的pH、PaO2、sO2升高，PaCO2明显降低；组织病理学检查发现肺组织的病理损伤得到缓解，其中联合用药组最明显，仅见少量细胞变性坏死（1/10）和炎性细胞浸润（1/7）；肺组织的水肿情况在给药后均能得到明显改善，与染毒对照组相比，肺组织的W/D及BALF中TP含量均明显降低。对BALF及肺组织的炎症改变检测发现，给药后，ED组TNF-α、IL-6、IL-8明显降低，联合用药能显著降低炎性因子的水平。肺组织的氧化损伤检测可见，联合用药后MDA、MPO明显降低，SOD、GSH明显升高，肺组织的氧化应激反应显著降低。<br>　　3.作用机制研究：染毒后，动物肺组织细胞中MMP降低，ROS含量及MPTP浓度明显升高，促凋亡蛋白Cyt-c、AIF、Smac及凋亡相关蛋白cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-9、cleaved-PARP的表达水平显著上调，细胞凋亡百分比明显升高。给予药物干预后，依达拉奉或地塞米松单用或联用均表现出一定的治疗效果，可见MMP水平升高，ROS含量与MPTP的浓度明显降低，Cyt-c、AIF、Smac及cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-9、cleaved-PARP的表达水平不同程度下调。TUNEL细胞凋亡检测可见给药后肺组织的细胞凋亡百分比显著降低。进一步分析可见二者联用对以上异常指标的改善效果更加明显。<br>　　结论：<br>　　1.本研究利用PVC套管在650℃温度下进行热解产烟，在产烟浓度为25mg/L的条件下，使用SD大鼠作为模型动物，连续染毒30min，喂养观察24h后，出现了明显的肺部刺激性损伤表现，成功建立了烟雾吸入性肺损伤动物模型，可以用于评价不同干预措施对烟雾吸入性肺损伤的影响。<br>　　2.本研究揭示了依达拉奉与地塞米松联用表现出的协同作用对PVC烟雾吸入性肺损伤展现了良好的治疗效果，其作用机制可能通过降低细胞的氧化应激反应，从而减轻线粒体结构或功能损伤，降低线粒体途径的细胞凋亡，进而改善损伤导致的肺部炎症及病理损伤，从而提高肺功能。<br>　　3.本研究进一步拓展了依达拉奉等抗炎抗氧化剂在吸入性肺损伤中的应用，结果表明，依达拉奉与地塞米松联用可以作为治疗火灾烟雾吸入性肺损伤的潜在治疗方案，相关临床研究值得进一步开展，以探讨这两种药物组合在临床病人上是否同样有效。