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摘要目的：<br>　　近年来，纳米载体的创新推动了药物递送系统（DDS）的发展，然而，纳米载体对生物屏障的穿透能力较弱，生物相容性与毒性问题未能得到有效解决。植物外泌体样纳米粒（ELNs）具有低免疫原性与低毒性，是一种潜在的纳米载体。曼宋酮衍生物b16的抗肿瘤活性优越，但其细胞毒性强且无特异性。本研究以姜黄ELNs作为b16递送载体，以期通过姜黄ELNs内姜黄素类化合物与b16协同发挥抗肿瘤活性，从而开发一种具有高效低毒的药物递送系统。<br>　　方法：<br>　　（1）分离：差速离心与超高速离心结合法分离姜黄根茎ELNs。<br>　　（2）初步理化表征：原子力显微镜（AFM）、透射电子显微镜（TEM）、动态光散射（DLS）、纳米粒子示踪技术（NTA）、薄层色谱法（TLC）、聚丙烯酰胺（SDS-PAGE）凝胶电泳和琼脂糖凝胶电泳。<br>　　（3）成分解析鉴定：通过质谱对脂质与蛋白质种类进行分析，通过聚合酶链式反应（PCR）和实时荧光定量PCR对RNA进行定性与定量分析；以高效液相色谱法（HPLC）对姜黄素进行定性与定量分析，并通过液质联用（LC-MS）与气质联用（GC-MS）对TELNs所含其他化合物进行鉴定。<br>　　（4）载药：HPLC测定曼宋酮衍生物b16含量的方法学考察；以载药率为指标筛选TELNs对b16的优势载药方法及参数；优选共孵育法构建TELNs-b16药物递送体系；通过AFM、NTA和DLS对TELNs-b16的形态、粒径和Zeta电位进行表征；以粒径为指标考察其稳定性，通过动态透析法考察体外药物释放特性；<br>　　（5）细胞学：IncuCyte系统实时监测b16处理的Hela的生长情况；另以MTT法评估TELNs的安全性以及b16与TELNs-b16抗OVCAR8和MCF-7/ADR的细胞增殖活性；采用荧光显微镜观察肿瘤细胞对TELNs的摄取。<br>　　（6）药动学：以昆明小鼠（30±2g）作为研究对象，考察TELNs和TELNs-b16的体内分布情况，以及在各脏器内的蓄积情况；并通过血液荧光强度反映TELNs的药动学特性。<br>　　结果：<br>　　（1）以超速离心法提取TELNs，AFM和TEM结果显示该提取物具有明显的球形纳米粒的形态，平均粒径为176.2±54.47nm，具有与外泌体相同的茶杯状双层膜结构，粒子分散相对均匀且形态统一，单个分布或聚集成团。NTA与DLS结果表明TELNs粒径呈正态分布，集中分布在180nm左右，粒径范围为80-400nm，Zeta电位为-17.6±1.19mV。<br>　　（2）TELNs含有磷脂酰乙醇胺（PE，17.4%）、甘油三脂（TG，12.3%）和磷脂酰肌醇（PI，9.82%）等615种脂质；姜黄素合成酶等73种参与次生代谢物生物合成的蛋白；CURS和DCS等姜黄素合成的关键基因；以及去甲氧基姜黄素、姜黄素等姜黄素类化合物和姜黄酮、姜黄烯等挥发油性物质。<br>　　（3）建立b16体外含量测定的HPLC方法，以优化的共孵育法制备了载药率为48.9±1.96%的TELNs-b16药物递送体系。AFM结果表明负载b16并不会影响TELNs的形态，但与空白TELNs相比，其粒径（221.7±5.0nm）和电位（-22.4±3.63mV）都略有增大。稳定性与体外释药特性结果表明，4℃条件更利于TELNs和TELNs-b16的保存，肿瘤环境更利于b16的释放。<br>　　（4）在体外，b16抑制多种肿瘤细胞的增殖，可作为强效的化疗药物；TELNs在50μg/mL高浓度下的作用72h，具有一定的细胞毒性（IC50=112μg/mL）；TELNs-b16在同等浓度下抑制肿瘤细胞增殖的能力比游离的b16更强。在体内，TELNs介导的药物主要分布在肝脏和肾脏，在脾脏和肺中略有分布；TELNs负载b16后并不会显著影响其体内分布与血液内循环时间，且其在血液中的半衰期1.72±0.08h。<br>　　结论：<br>　　在本研究中，提取TELNs，对其生化信息表征。优化载药参数，成功构建TELNs-b16药物递送体系。TELNs-b16在体外具有更强的抗肿瘤细胞增殖活性，在体内更是倾向于向肝脏和肾脏等器官富集。为TELNs作为载体应用提供了物质与理论基础。