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摘要目的：<br>　　1、明确β-谷甾醇对血管紧张素Ⅱ（AngiotensinⅡ,AngⅡ）诱导的大鼠胸大动脉血管平滑肌细胞系（A7r5细胞）迁移的作用。<br>　　2、研究β-谷甾醇抑制A7r5细胞迁移的分子机制：探讨β-谷甾醇对PPARG、AMPK和mTOR表达的影响以及PPARG与AMPK/mTOR通路的关系。<br>　　方法：<br>　　1、利用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT法）测定AngⅡ和β-谷甾醇对A7r5细胞毒性作用，确定AngⅡ和β-谷甾醇的作用时间及浓度范围。<br>　　2、利用AngⅡ诱导A7r5细胞迁移，构建AngⅡ诱导的细胞过度迁移的模型。<br>　　3、运用Transwell实验和划痕实验测定β-谷甾醇对AngⅡ诱导的A7r5细胞迁移的影响。<br>　　4、利用CellCountingKit-8细胞计数法（CCK-8法）测定β-谷甾醇对细胞增殖的影响。<br>　　5、荧光探针DCFH-DA法检测细胞活性氧（ROS）的水平，WST-8法检测细胞总超氧化物歧化酶（SOD）水平，显色反应检测细胞过氧化氢酶（CAT）水平。<br>　　6、应用网络药理学方法分析β-谷甾醇调控VSMCs细胞迁移的可能靶点与信号通路，并对潜在的核心靶点蛋白进行分子对接。<br>　　7、定量实时聚合酶链锁反应(Q-PCR)和蛋白免疫印迹法检测β-谷甾醇对AngⅡ诱导的细胞迁移时PPARG、AMPK及mTOR表达的变化，检测增殖相关蛋白（PCNA、CyclinD1）的表达情况。<br>　　8、应用蛋白免疫印迹法、Transwell实验和划痕实验探究在PPARG抑制剂与mTOR激活剂作用下，PPARG与AMPK/mTOR通路是否调控细胞迁移及两者之间的关系。<br>　　结果：<br>　　1、β-谷甾醇浓度在2.5、5、10、20μM,作用时间在0~24h时，对A7r5细胞无毒性作用。<br>　　2、利用AngⅡ诱导A7r5细胞成功建立VSMCs过度迁移的模型。在浓度为4μM,作用时间为24h时，AngⅡ诱导细胞迁移的效果最明显（过度迁移率为32.3%，P＜0.05），在此条件下细胞状态良好且稳定，无细胞毒性。<br>　　3、β-谷甾醇能有效抑制AngⅡ诱导的VSMCs迁移，在浓度为5~20μM时呈浓度依赖关系。当浓度为20μM作用24h，细胞迁移抑制率达到36.2%（P＜0.05）。<br>　　4、β-谷甾醇能够抑制AngⅡ诱导的细胞增殖并下调相关增殖蛋白PCNA、CyclinD1的蛋白与mRNA水平。<br>　　5、β-谷甾醇能够降低迁移模型细胞中ROS水平以及升高模型细胞SOD、CAT水平。<br>　　6、网络药理学分析β-谷甾醇调控细胞迁移的可能靶点为ESR2、SOD2、AR、PPARG、PPAR、AMPK、mTOR，潜在信号通路有MAPK/ERK（DAPK）、VEGF(P300/CBP、HO-1)、PPAR（RXR、PPARA）等通路。<br>　　7、β-谷甾醇能上调模型组细胞内因AngⅡ诱导而降低的PPARG水平，差异具有统计学意义（P＜0.05）。当PPARG表达被PPARG抑制剂T0070907抑制后，Transwell与划痕实验结果显示，β-谷甾醇对A7R5细胞的抑制作用减弱。提示β-谷甾醇可能通过激活PPARG抑制AngⅡ诱导的A7R5细胞迁移。<br>　　8、β-谷甾醇能上调模型组细胞内AMPK磷酸化水平，同时下调mTOR总表达及磷酸化水平，表明β-谷甾醇可以使因AngⅡ诱导而被抑制的AMPK/mTOR通路表达水平得到一定程度的逆转，差异具有统计学意义（P＜0.05）。mTOR激活剂抑制AMPK/mTOR表达后，Transwell与划痕实验结果显示，β-谷甾醇对A7R5细胞的抑制作用减弱。提示β-谷甾醇可能通过调控AMPK/mTOR信号通路来抑制AngⅡ诱导的A7R5细胞迁移。<br>　　9、PPARG抑制剂T0070907可以降低AMPK磷酸化水平，升高mTOR总表达及磷酸化水平，即PPARG被抑制的同时，AMPK/mTOR信号通路也被部分抑制。提示着β-谷甾醇在抑制细胞迁移时，PPARG可能是AMPK/mTOR的上游靶点。<br>　　结论：<br>　　β-谷甾醇能够有效抑制AngⅡ诱导的A7r5细胞迁移，在浓度为5~20μM时，抑制效果呈浓度依赖性，且β-谷甾醇浓度为20μM，作用时间为24h时，抑制效果最佳，此时抑制率达到36.2%（P＜0.05）。β-谷甾醇抑制A7r5细胞迁移的机制与氧化应激有关，可能是通过PPARG/AMPK/mTOR信号通路实现的。