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摘要目的：胰脂肪酶是由胰腺产生后释放到胃肠体系，与肝脏产生的胆汁酸盐协同作用，将膳食脂肪分解为脂肪酸和甘油，负责约50%～70%的膳食脂肪的水解，是调控哺乳动物脂类物质吸收的关键酶。在以往的研究中，通常使用猪胰脂肪酶（pPL）作为酶源来筛选和表征PL抑制剂，从而产生多种pPL抑制剂。相比之下，对人胰脂肪酶（hPL）有效的抑制剂却鲜有报道。因此，本研究旨在以hPL为酶源，以近红外探针DDAO-ol为底物构建抑制剂高通量筛选与评价方法，通过对所收集的百余种中草药进行检测，发现天然强效的hPL抑制剂并研究其抑制机制，从而进一步阐释中草药的减肥和降血脂药效物质基础，为肥胖及相关代谢疾病的治疗提供候选药物。此外，本研究测定了64种天然和合成的黄酮类化合物对hPL的抑制作用，并讨论了黄酮类化合物作为hPL抑制剂的结构抑制关系，为药物化学家改进黄酮类衍生物作为hPL抑制剂提供有价值的研究基础。<br>　　方法：（1）构建以特异性荧光探针DDAO-ol为底物的hPL抑制剂高通量筛选方法，对收集的百余种中草药和64种天然及合成的黄酮类化合物进行抑制活性测定；（2）采用LC-TOF-MS/MS进行指纹图谱采集来鉴定中草药中的活性化合物；（3）对新鉴定的强效抑制剂进行半数抑制浓度(IC50)和抑制常数(Ki)的测定并进行酶抑制动力学分析；（4）通过抑制剂分子与hPL蛋白晶体结构的对接模拟和分子动力学模拟，进一步验证抑制剂与hPL的相互作用位点和作用强度。<br>　　结果：（1）以hPL特异性近红外探针DDAO-ol为底物，构建hPL抑制剂筛选评价体系。通过高通量筛选发现藤茶提取物（AGE）具有抗hPL的生物活性，利用一系列研究技术鉴定出有效的hPL抑制剂。研究结果表明，AGE中几乎所有的黄酮类化合物都是天然存在的hPL抑制剂，其中两种含量丰富的黄酮类化合物(二氢杨梅素和异二氢杨梅素)是中度的hPL抑制剂，而杨梅素和槲皮素被鉴定为强效的hPL抑制剂，IC50值约为1.5 μM。抑制动力学分析表明，杨梅素和槲皮素以非竞争性的方式抑制hPL，其Ki值小于2.5 μM。分子动力学模拟表明，杨梅素和槲皮素可以在变构位点紧密结合hPL。（2）通过研究64种黄酮类化合物对hPL的抑制活性，结果表明黄酮类化合物骨架上的酚羟基的数量和位置对hPL的抑制作用至关重要， C-5位形成的邻苯二酚或邻苯三酚基团能增强hPL抑制能力，而C-6，C-7位的羟基变成甲氧基化，则导致hPL抑制作用的丧失；其次B环上的C-4’引入羟基或者氨基促进了hPL抑制能力，而甲氧基化将降低对hPL的抑制作用；B环上C’-4位形成邻苯二酚会增加对hPL的抑制作用；最后C-2和C-3的形成不饱和的双键会增加对hPL的抑制作用。<br>　　结论：在本研究中通过高通量筛选百余种中草药，发现AGE对hPL具有显著的抑制活性，再通过LC-TOF-MS/MS进行指纹图谱采集发现AGE中的多种黄酮类化合物是hPL的天然抑制剂。随后通过收集64种黄酮类化合物讨论了黄酮类化合物对hPL的结构抑制关系。这些发现为AGE的抗肥胖作用提供了直接证据，且这些新发现的hPL抑制剂可以作为开发新型药物的先导化合物。