检索历史 清除

摘要研究背景：急性坏死性胰腺炎(Acute necrotizing pancreatitis，ANP)是一种常见的急重症，发病率、死亡率高。经研究证实多种细胞因子如TNF-α、IL-1β、IL-6 等活化与急性胰腺炎(Acute pancreatitis，AP)的发生进展关系密切。而Toll 样受体4(Toll-like receptor 4，TLR4)、核因子-κB(Nuclear factor-kappaB，NF-κB)与这些细胞因子的活化密切相关。它们在AP 发生发展中作为介导炎症反应的枢纽起着重要作用。以往认为TLR4 与NF-κB 是上下游关系：即TLR4 触发细胞内信号传导通路，从而激活NF-κB，调控大量细胞因子释放，介导炎性反应。目前认为能激活NF-κB 的除了TLR4 调控的细胞内信号通路外还有TNF-α、IL-1 调控的细胞内信号通路，且对TLR4/NF-κB 信号通路具体的传导路径又有了新的认识。因此有必要重新认识TLR4 与NF-κB 之间的关系。 研究目的：观察ANP 大鼠胰腺组织中TLR4 的表达情况；并且应用NF-κB 活化抑制剂四氢化吡咯二硫代氨基甲酸酯(pyrrolidinedithiocarbamate，PDTC)进行干预，观察阻断NF-κB 以后，TLR4 在ANP大鼠胰腺组织中表达的变化，探讨ANP 中TLR4 与NF-κB 的关系及NF-κB 的活性对TLR4 表达的影响。 研究方法： 1）雄性SD 大鼠72 只，随机分为假手术组(24 只)、ANP组（24 只）、PDTC 预处理组（24 只）三组。胰管内注入5％牛磺胆酸钠建立大鼠ANP 模型；PDTC 预处理组在建立ANP 模型前1h，100mg/kg腹腔注射PDTC。H&E 染色及透射电镜观察胰腺组织病理学改变；酶动力化学法检测血清淀粉酶（AMS）和乳酸脱氢酶（LDH）；ELISA 法检测血清TNF-α、IL-1β、IL-6；RT-PCR 法检测胰腺组织TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA 表达；免疫组化及Western blot 法检测胰腺组织TLR4 和NF-κB 蛋白表达。 研究结果： 1）同假手术组相比，ANP 组大鼠胰腺组织光镜下有明显出血、腺泡坏死和炎症浸润；电镜下大鼠腺泡细胞粗面内质网明显扩张、酶原颗粒明显减少、线粒体明显肿胀；血清AMS 和LDH 含量增加（P<0.05）；血清TNF-α、IL-1β、IL-6 含量增加（P<0.05）；胰腺组织TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA 表达增加（P<0.05）；胰腺组织TLR4 和NF-κB表达增加（P<0.05）。 2）同ANP 组大鼠相比，PDTC 预处理组大鼠胰腺组织出血、腺泡坏死和炎症浸润程度明显减轻；电镜下胰腺组织病理学改变明显减轻；血清AMS 和LDH 含量，TNF-α、IL-1β、IL-6 含量明显减少（P<0.05）；胰腺组织TNF-α、IL-1β、IL-6mRNA 表达，TLR4和NF-κB 表达明显减少（P<0.05）。 主要结论及意义： 1）TLR4 和NF-κB 在ANP 大鼠胰腺组织中的表达水平明显增高，提示TLR4 和NF-κB在ANP 的发生发展中起重要作用。 2）PDTC 抑制ANP 大鼠胰腺组织中NF-κB 表达的同时，下调TLR4 蛋白水平表达和细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6 表达，提示PDTC 对ANP有治疗作用；PDTC 能显著降低ANP 严重程度的机制可能不仅是抑制了NF-κB，还可能是由于存在其它调节机制。 3）在ANP 发生发展中，TLR4和NF-κB可能不是简单的上下游关系，重新认识并搞清楚TLR4 和NF-κB之间的关系，对炎症通路研究的进一步深入及明确AP 的发病机制，从而有效治疗ANP，有着重要的理论价值和临床意义。