检索历史 清除

摘要目的：双酚A（BisphenolA，BPA）是塑料合成中的重要基础单体，在现代食品包装中广泛使用。在高温处理或者酸性等条件下，包装材料中的BPA会转移到食品中，影响人类健康。然而，发育期BPA暴露诱导小鼠脂质代谢紊乱的潜在机制有待探究。基于此，体外实验首先利用RNA-Seq对BPA诱导3T3-L1前脂肪细胞成脂的潜在机制进行检测。体内实验建立C57BL/6小鼠BPA暴露模型，进一步研究发育期BPA暴露对小鼠脂质代谢的影响及其作用机制。<br>　　方法：通过对3T3-L1细胞进行不同剂量的BPA暴露，观察其细胞脂滴分泌情况，并进行转录组学测序，分析对照组和暴露组之间的基因表达和通路差异。体内实验将出生后（postnatalday，PND）第1天的雄性仔鼠随机分为三组，分别为对照组、低剂量BPA暴露组（50μg/kg/day）和高剂量BPA暴露组（500μg/kg/day），暴露8周，检测小鼠的葡萄糖耐量情况，血清中甘油三酯（TG）、总胆固醇（TCHO）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）和高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）的含量；进一步通过HE染色分析小鼠脂肪和肝脏组织变化情况，并通过qPCR和WB评估肝脏和脂肪组织中关键基因的转录和蛋白表达水平。最后，以3T3-L1和Hepa1-6细胞为细胞模型体外验证关键基因硬脂酰辅酶A去饱和酶1（SCD1）在BPA致小鼠脂质紊乱中的作用机制。<br>　　结果：（1）体外实验：油红染色和TG含量检测表明BPA暴露显著增加3T3-L1细胞的脂滴分泌。RNA-Seq分析表明，BPA暴露后有334基因显著上调，309个基因显著下调。主要涉及糖鞘脂合成、脂肪细胞脂解调节和PPAR信号通路等多种和脂质代谢相关的过程。通过整合分析筛选出关键基因SCD1、ANGPT4、PLIN1、ELOVL6、SOD3、ApoD、GNAI2、LPL、ACSBG1、TSHR、ANGPTL4和SAA3等。<br>　　（2）体内实验：500μg/kg/day双酚A灌胃8周后，雄性小鼠腰围明显增加，附睾脂肪组织重量显著上升，HE染色显示BPA暴露后脂肪组织中脂肪细胞体积增加、直径增大；相对于对照组而言，BPA暴露组小鼠血清中TG和LDL-C的含量降低，HDL-C含量增加，提示小鼠的脂质代谢受到BPA干扰发生紊乱；对照组肝细胞结构完整，无脂滴、变性和坏死情况，高剂量组肝脏肝细胞出现形态不规则、脂肪沉积和非酒精性脂肪肝（non-alcoholicfattyliverdisease，NAFLD）样表型。BPA暴露后小鼠肝脏和脂肪中SCD1、血管生成素4（ANGPT4）、围脂滴蛋白1（PLIN1）转录水平上升，载脂蛋白D（ApoD）转录水平下降；肝脏中SCD1和PLIN1蛋白表达水平显著上升，ApoD蛋白水平显著下降，这些参与脂肪生成和运输的基因表达异常可能直接导致NAFLD的产生。<br>　　（3）关键基因功能验证：以Hepa1-6和3T3-L1细胞为体外验证的模型，验证SCD1的功能，结果表明添加SCD1活性抑制剂MF-438后，BPA诱导产生的脂滴分泌增加现象消失，表明SCD1是BPA干扰脂质代谢中的重要靶基因。同时，抑制SCD1后，Hepa1-6细胞和3T3-L1前脂肪细胞中PLIN1、ELOVL脂肪酸延长酶6（ELOVL6）和LPL表达出现恢复的趋势。<br>　　结论：本研究结果表明，BPA介导SCD1导致小鼠脂肪沉积。SCD1及其通过调控下游的PLIN1、ELOVL6和LPL等基因进一步调控NAFLD的发生。因此，发育期BPA暴露且肥胖或患NAFLD的人群应密切关注SCD1表达异常。