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摘要研究背景<br>　　甲状腺癌对放疗、化疗均不敏感，因绝大多数甲状腺癌为具有摄取碘能力的分化型甲状腺癌（differentiatedthyroidcarcinoma,DTC），故可以用放射性碘治疗DTC，尤其是转移灶。但是低分化甲状腺癌（poorlydifferentiatedthyroidcarcinoma,PDTC）摄取碘的能力差，对放射性碘治疗不敏感，且侵袭迁移能力较DTC更强，故预后较差。研究表明红景天苷具有很强的抗氧化性、抗癌等作用，而红景天苷对PDTC的作用，目前未见报道。<br>　　目的<br>　　本课题通过实验探索红景天苷对人低分化甲状腺癌WRO细胞的摄碘能力、侵袭迁移及凋亡的影响，旨在阐明红景天苷抗PDTC的作用及机制，以帮助解决PDTC临床治疗的难题。<br>　　方法<br>　　采用CCK8实验筛选红景天苷最佳的干预浓度和干预时间；分别采用qRT-PCR和Westernblot实验检测WRO细胞中钠/碘同向转运体（sodium/iodidesymporter,NIS）mRNA和蛋白的表达；加入氧化应激激活剂过氧化氢（hydrogenperoxide,H2O2）后分别采用Westernblot实验和活性氧分析试剂盒测定红景天苷对于NIS和活性氧（reactiveoxygenspecies,ROS）的影响；采用放射性碘摄取实验检测WRO细胞的碘摄取能力。采用划痕实验、Transwell迁移、Transwell侵袭实验和流式细胞术分别检测红景天苷对正常甲状腺滤泡上皮细胞Nthy-ori3-1和WRO细胞迁移、侵袭和凋亡的影响；采用qRT-PCR实验检测MMP2和MMP9mRNA的表达；WRO细胞中加入JAK2/STAT3信号通路抑制剂AG490之前和之后，分别检测MMP2、MMP9、JAK2、pJAK2、STAT3和pSTAT3蛋白的表达。最后，检测WRO细胞中凋亡相关蛋白Bax、cleavedcaspase3和Bcl-2蛋白的表达水平。<br>　　结果<br>　　①CCK8实验显示：随着浓度的增加，红景天苷抑制细胞增殖的作用增强，WRO细胞的存活率分别为：对照组（101%±2.7%），1μg/ml（104.3%±7.1%），5μg/ml（84%±3.6%），10μg/ml（72%±3%），20μg/ml（53.7%±5.5%），40μg/ml（43%±4%）。最终得出，红景天苷最佳的干预浓度是40μg/ml；同样，随着时间的增加，在40μg/ml红景天苷培养条件下，WRO细胞的存活率分别为：0h（97.7%±2.5%），24h（93%±2%），48h（72%±4.6%），72h（48.7%±6%），得出最佳干预时间是72h。随后的实验都是用的上述的最佳浓度和最佳时间。<br>　　②与对照组比较，红景天苷显著上调了NISmRNA（P＜0.05）和蛋白的表达（P＜0.05）。<br>　　③与对照组比较，红景天苷显著降低WRO细胞内ROS水平（P＜0.05）；与红景天苷组相比，氧化应激激活剂H2O2逆转了NIS的增加和ROS水平的降低（P＜0.05,P＜0.05）。<br>　　④但是放射性碘摄取实验结果显示，与对照组比较，红景天苷不能提高WRO细胞的摄碘率（P＞0.05）。<br>　　本研究还对红景天苷是否能抑制WRO细胞的迁移和侵袭进行了研究，结果显示：⑤划痕实验和Transwell迁移实验结果显示：与对照组比较，红景天苷对WRO细胞的迁移有剂量依赖性的抑制作用（P＜0.05）；Transwell侵袭实验结果：与对照组比较，红景天苷对WRO细胞的侵袭有剂量依赖性的抑制作用（P＜0.05）；上述实验表明红景天苷显著的抑制WRO细胞的迁移和侵袭。<br>　　此外，本实验还对红景天苷抑制WRO细胞迁移和侵袭的可能机制进行了初步探索，结果显示：<br>　　⑥与对照组比较，红景天苷显著抑制了WRO细胞中MMP2、MMP9mRNA和蛋白水平的表达及JAK2、STAT3蛋白的磷酸化（均P＜0.05）；与对照组比较，JAK2/STAT3信号通路抑制剂AG490抑制了WRO细胞中JAK2和STAT3蛋白的磷酸化及MMP2和MMP9蛋白的表达（均P＜0.05）；与红景天苷组或AG490组比较，红景天苷+AG490组中pJAK2/JAK2、pSTAT3/STAT3、MMP2和MMP9蛋白的表达更低（均P＜0.05）；结果表明，红景天苷的作用相当于JAK2/STAT3信号通路抑制剂，通过抑制JAK2和STAT3蛋白的磷酸化，抑制JAK2/STAT3信号通路的传递，降低MMP2和MMP9蛋白的表达。<br>　　目前，治疗癌症的一个较好的策略就是促进癌症细胞的凋亡，尤其是对不摄取碘、又对放疗化疗都不敏感的PDTC。研究表明红景天苷可以促进多种肿瘤细胞的凋亡，但其对PDTC的作用，未见报道。因此，我们进一步研究了红景天苷对于WRO细胞凋亡的影响，结果显示：<br>　　⑦与对照组比较，红景天苷促进了WRO细胞的凋亡，增加了促凋亡蛋白Bax和cleavedcaspase3的表达，降低了抗凋亡蛋白Bcl-2的表达（均P＜0.05）。<br>　　结论<br>　　①红景天苷能通过降低ROS显著增加NISmRNA和蛋白的表达，但不能提高低分化甲状腺癌WRO细胞的摄碘能力；<br>　　②红景天苷能显著抑制WRO细胞的迁移和侵袭，其机制可能是通过抑制JAK2/STAT3信号通路降低了MMP2和MMP9蛋白的表达；<br>　　③此外，红景天苷还能通过降低Bcl-2蛋白、增加cleavedcaspase3和Bax蛋白的表达促进WRO细胞的凋亡。