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摘要人表皮生长因子受体2（human epidermal growth factor receptor-2，HER2）在许多实体瘤中过表达，已成为HER2阳性肿瘤的治疗靶点。赫赛汀（Herceptin/Trastuzumab）是首个被食品药品监督管理局（Food and Drug Administration，FDA）批准的用于转移性乳腺癌治疗的HER2靶向治疗药物，其主要作用机制是识别HER2蛋白后招募表达FcγRⅢa [CD16A]的自然杀伤（nature kill，NK）细胞，发挥ADCC（antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity，ADCC）效应，攻击并杀伤肿瘤细胞。<br>　　目的：检测HER2蛋白的何种结构域更适合激发赫赛汀的ADCC效应。<br>　　方法：真核表达五种包含HER2胞外段不同结构域的蛋白，即HER2-Fc、HER2-His、T23-561-Fc、T276-T652-Fc、T276-T652-His。通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（ sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE）和尺寸排除色谱法（size exclusion chromatography，SEC）对蛋白分子量及纯度进行检测。酶联免疫吸附实验（enzyme linked immunosorbent assay， ELISA）检测五种蛋白与赫赛汀的结合。Fortebio实验验证蛋白与赫赛汀结合的亲和力。NK细胞活化实验比较这五种蛋白增强赫赛汀ADCC效应的能力差异。实时荧光定量多聚核苷酸链式反应（Real-time Quantitative polymerase chain reaction，qPCR）实验检测肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α)、颗粒酶（granzyme）和穿孔素（perforin）的mRNA表达水平。加入相应信号通路的抑制剂观察是否能够阻断NK细胞活化后脱颗粒和干扰素-γ（Interferon-γ，IFN-γ）的释放。<br>　　结果：成功制备纯度较高的目的蛋白。ELISA结果显示HER2-Fc、HER2-His和T276-T652-His都表现出与赫赛汀较好的结合能力，T276-T652-Fc结合较差，T23-561-Fc则完全不结合。Fortebio结果显示HER2-His和T276-T652-His两种蛋白均与赫赛汀有较好的亲和力。NK细胞活化实验结果显示HER2-Fc和T276-T652-His能显著增强赫赛汀刺激NK细胞脱颗粒和分泌IFN-γ，且效应呈浓度梯度依赖性。qPCR实验显示HER2-Fc和T276-T652-His激活NK细胞释放穿孔素的作用相当。抑制剂掺入实验证明wortmannin、MK-2206、Rapamycin、bpV四种抑制剂中wortmannin （ PI3K抑制剂）能抑制NK细胞活化后脱颗粒和IFN-γ分泌。MK-2206（AKT抑制剂）则对NK细胞释放IFN-γ有抑制作用。<br>　　结论：本研究验证了T276-T652-His具有增强赫赛汀ADCC功能的作用，且与HER2-Fc相当，为后续将HER2蛋白用于肿瘤免疫治疗研究打下了基础。