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摘要目的:研究蒙药阿拉嘎-斑布药效成分斑蝥素（Cantharidin，CTD）对H22肝癌荷瘤小鼠免疫功能的调节作用及对PD-1/PD-L1表达的影响，并探讨其作用的可能机制，为斑蝥素抗肝癌作用机制的阐明提供实验依据。<br>　　方法:H22肝癌荷瘤小鼠植瘤成功后被随机分为：模型组（Model）、5-氟尿嘧啶（5-Fluorouracil，5-Fu）阳性对照组和 CTD 高、中、低剂量组，每组 10 只；空白组(Blank)为 10 只正常小鼠。CTD 组每日分别按 1 mg/kg、0.5 mg/kg、0.25 mg/kg剂量注射给药，5-Fu组按25 mg/kg每2天注射给药一次，模型组每日注射一次生理盐水；给药周期 15 天。1.观察小鼠一般状态和行为，每间隔2天称量一次体重，记录体重变化。2.每周测量肿瘤纵、横径2次，绘制肿瘤生长曲线；解剖分离出肿瘤组织后称重，计算药物对肿瘤的抑制率。3.HE 染色观察肿瘤组织形态学变化。4.分离脾脏后称重，计算脾脏指数。5.ELISA实验检测肿瘤组织中 IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ、TNF-α的含量。6.流式细胞术检测外周血中CD4+T、CD8+T、Treg、B淋巴细胞比例以及CD4+/CD8+比值。 7.免疫组织化学染色检测肿瘤组织中PD-1、PD-L1的表达情况。8.RT-qPCR检测荷瘤鼠脾脏组织PD-1 mRNA、肿瘤组织PD-L1 mRNA的表达。9.Western Blot 检测荷瘤鼠脾脏组织中PD-1和肿瘤组织中PD-L1、HIF-1α、PI3K/AKT蛋白的表达。<br>　　结果:1.一般行为：空白组小鼠精神状态、饮食正常，模型组小鼠精神状态较差，行动力下降，毛发发暗、打结，5-Fu组和 CTD高剂量组小鼠生存状态、行动力、饮食情况较好。体重曲线：与空白组相比，各实验组小鼠体重均有明显增长，模型组小鼠体重增加最为显著（P＜0.05）；与模型组相比，5-Fu组和CTD高剂量组小鼠体重增长最为缓慢（P＜0.05）。2.肿瘤生长曲线显示，模型组肿瘤生长快、体积较大；5-Fu 组和 CTD 各剂量组小鼠肿瘤生长变缓，体积和质量有明显减小（P＜0.05），5-Fu组小鼠肿瘤的抑制率为 45.09%，CTD高剂量组的抑瘤率为 38.96%，中、低剂量组抑瘤效果不显著。3.HE 染色结果显示，模型组肿瘤细胞数量多且排列紧密、不规则，细胞核深染；5-Fu组和CTD各剂量组肿瘤细胞的密度有所减小，排列疏松，出现程度不同的坏死和凋亡，空泡数量增多。4.脾脏指数结果显示，与空白组相比，模型组和给药组脾脏指数均有明显升高（P＜0.05），与模型组相比，5-Fu组和CTD高剂量组脾脏指数降低最明显（P＜0.05）。5.ELISA 实验结果显示：在肿瘤悬液中，与模型组相比，5-Fu 组和 CTD 组中 IL-2、IL-4、IFN-γ 含量均增高（P＜0.01），IL-10、TNF-ɑ 含量均降低（P＜0.05）。6.流式细胞术检测结果显示：与空白组相比，模型组小鼠 CD4+T、CD8+T 细胞和 B 细胞比例均明显降低（P＜0.05），而 Treg 比例明显升高（P＜0.05）、CD4+/CD8+比值降低（P＞0.05），5-Fu组和CTD组小鼠CD4+T、CD8+T和B细胞比例稍有降低（P＜0.05）；与模型组相比，5-Fu组和CTD组小鼠CD4+T、CD8+T和 B 细胞比例均有所升高（P＜0.05），CTD 组小鼠 CD4+/CD8+比值升高（P＜0.05）， Treg 比例明显降低（P＜0.01）。7. 免疫组化染色结果显示，与模型组相比，5-Fu 组和CTD组PD-1、PD-L1阳性表达均明显减少（P＜0.01）。8.RT-qPCR结果显示：与模型组相比，5-Fu和CTD均能降低脾脏PD-1、肿瘤组织PD-L1 mRNA的表达水平（P＜0.01）。9.Western blot结果显示：与模型组相比，5-Fu和 CTD能降低脾脏组织中 PD-1、肿瘤组织中PD-L1蛋白的表达水平（P＜0.01 or P＜0.05），并能够下调肿瘤组织中PI3K/AKT、HIF-1α蛋白的表达水平（P＜0.01 or P＜0.05）。<br>　　结论:斑蝥素能够抑制肝癌荷瘤鼠肿瘤的生长、降低 PD-1/PD-L1的表达，提高小鼠免疫功能，机制可能是通过降低 HIF-1α的表达阻断PD-1/PD-L1信号通路，进而抑制下游PI3K/AKT通路的发展，促进T、B细胞增殖分化，使 IL-2和 IFN-γ等细胞因子分泌增多，从而增强机体的抗肿瘤免疫功能。