摘要目的对内蒙古不同地区蜱虫微生物多样性进行检测分析,从而评估内蒙古地区不同地理位置蜱虫携带微生物群特点,发现致病菌无形体后探究内蒙古地区草原革蜱无形体感染情况,鉴定蜱传无形体种属并进行系统进化分析。方法(1)本研究从内蒙古地区四个主要牧场的绵羊体表共收集草原革蜱905只,全沟硬蜱36只,由这些蜱虫制备的DNA样本池,依据地区和蜱种不同随机选择样本通过PacBio全长16SrDNA三代测序进行微生物多样性检测。(2)检测结果显示草原革蜱样本中普遍携带致病菌无形体,而对于内蒙古地区蜱传无形体的相关文献报道几乎没有,因此基于无形体16SrRNA基因、groEL基因和MSP4基因合成特异引物,对内蒙古地区采集的蜱虫标本进行PCR扩增,将阳性样本进行测序和分析并构建系统发育进化树。结果(1)微生物多样性分析中主要发现的细菌菌属有立克次体(35.27%),节肢动物共生菌(10.84%)以及不动杆菌属(7.17%)。不同地区和蜱种间微生物组成存在较大差异,在全沟硬蜱组中发现了贝利立克次体,并且在鄂尔多斯草原革蜱样本组中发现了无形体和新型立克次体Ac37b。(2)对内蒙古地区无形体进行检测,阿尔山地区36只全沟硬蜱中未检测出无形体,采集的905只草原革蜱中有168只饱血蜱与737只未饱血蜱共分为220个蜱虫混合样本,经检测共有41个无形体阳性样本,均为单只饱血蜱样本,总阳性检出率为4.53%(41/905),其中呼伦贝尔地区阳性率为1.03%(3/292);赤峰地区阳性率为3.13%(17/543);鄂尔多斯地区阳性率为30%(21/70),Blast比对分析结果显示与绵羊无形体同源性高达99%以上。系统发育进化树和同源性比对分析结果显示内蒙古地区16SrRNA基因的序列与新疆绵羊无形体xjmns03(JN400674)同源性最高,为99.49%;groEL基因序列与苏丹青尼罗州绵羊无形体G-BN-40(MG383903)同源性最高,为98.77%;MSP4基因序列与陕西绵羊无形体D/SX786(MN307493)同源性最高,为100.00%。结论(1)本次研究在内蒙地区全沟硬蜱中首次发现了贝利立克次体,并且在鄂尔多斯草原革蜱中发现了新型立克次体Ac37b。通过对不同地区蜱虫微生物多样性检测和分析和内蒙古地区的新发蜱传病原体的检出,为内蒙古地区蜱传疾病的防控提供了病原学本底数据。(2)内蒙古地区存在蜱传绵羊无形体,鄂尔多斯地区阳性率最高,为避免蜱传疾病对动物及人类健康造成危害,应重点对鄂尔多斯地区进行科学防控。
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