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摘要【目的】<br>　　鼻咽癌放射抵抗易引起肿瘤残留，其导致复发和转移是鼻咽癌治疗失败的主要原因。因此，本研究通过筛选出与鼻咽癌放射抵抗相关的基因，探索其放射抵抗的分子机制及表达与鼻咽癌放疗后临床预后的相关性，对指导临床个体化治疗、减轻鼻咽癌疾病负担和提高生存有一定的临床意义。<br>　　【方法】<br>　　1.构建鼻咽癌放疗抵抗细胞系C666-1-IR，进行细胞迁移、侵袭、凋亡实验，利用转录因子报告基因系统发现，C666-1中p53存在较高的本底活性，而C666-1-IR中p53活性降低，结合生信数据分析以及基因芯片数据(GSE32389)筛选与p53密切相关、影响放疗敏感性的基因SIVA1和UBE2A。同时，收集TCGA数据库头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)中SIVA1和UBE2AmRNA水平进行Kaplan-Meier生存分析。<br>　　2.选择厦门大学附属第一医院2016年6月至2018年12月期间收治的52例初诊鼻咽癌患者为研究对象，随访时间截止至2020年12月。免疫组化实验检测鼻咽癌患者放疗前标本SIVA1和UBE2A蛋白水平，由两位病理科医师根据相应标准对蛋白表达水平进行评分。同时收集鼻咽癌患者临床特征和预后资料。<br>　　3.采用卡方检验、Kaplan-Meier生存分析和COX风险回归模型分析蛋白表达水平与临床参数及预后的关系。<br>　　【结果】<br>　　1.鼻咽癌抵抗细胞系增强侵袭和抗凋亡能力。鼻咽癌细胞系C666-1-IR组和C666-1组相比细胞迁移能力无差异(P＞0.05)，而侵袭力增强(P＜0.001)。细胞凋亡实验显示，C666-1-IR组细胞凋亡比率较C666-1组细胞降低(0.377%vs.5.32%;P＜0.05)。<br>　　2.筛选鼻咽癌放疗抵抗基因。转录因子报告基因系统结果发现细胞系C666-1-IR组中p53水平较C666-1组中降低。将C666-1-IR组与C666-1组mRNA进行转录组测序，对差异基因行GO富集分析显示，C666-1-IR组中p53介导的“NegativeRegulationofSignalTransductionbyp53ClassMediator”、“NegativeRegulationofIntrinsicApoptoticSignalingPathwayinResponsetoDNADamage”和“NegativeRegulationofApoptoticSignalPathway”通路受到抑制。同时结合GEO数据库基因芯片(GSE32389)鼻咽癌放疗敏感与抵抗组织数据，筛选出差异基因SIVA1和UBE2A。运用TCGA公共数据库中HNSCC数据进一步分析，SIVA1mRNA高表达患者3年总生存率(OS)显著低于SIVA1mRNA低表达患者(P＜0.001)；UBE2AmRNA高表达患者3年OS显著低于UBE2AmRNA低表达患者(P=0.02)。<br>　　3.SIVA1和UBE2A表达与临床预后相关性。通过免疫组化在蛋白水平探究，SIVA1和UBE2A蛋白在鼻咽癌的细胞核和细胞浆中均表达。52例样本中，SIVA1蛋白在鼻咽癌组织中表达占一半以上(31/52)，而UBE2A在肿瘤组织中普遍表达(50/52)。卡方检验分析SIVA1蛋白表达水平与年龄(x2=8.985，P=0.003)显著相关。UBE2A蛋白表达与年龄(x2=5.039，P=0.025)、WHO分型(x2=10.703，P=0.005)、N分期(x2=6.002，P=0.014)、血清EBVDNA水平(x2=4.302，P=0.038)显著相关。肿瘤细胞中SIVA1positive表达或UBE2Ahigh表达的患者较SIVA1negative表达或UBE2Alow表达的患者放疗后6个月评估为放疗抵抗比例显著增高（P=0.012；P=0.0165），出现疾病复发或转移比例增高（P=0.014；P＜0.001），无进展生存(PFS)降低(HR=3.984[1.356-11.706]，P＜0.001；HR=4.983[1.762-14.088]，P＜0.001)。肿瘤细胞SIVA1positive+UBE2Ahigh共表达患者组较SIVA1positive+UBE2Alow表达/SIVA1negative+UBE2Ahigh表达患者组、SIVA1negative+UBE2Alow表达患者组在放疗后6个月评估为放疗抵抗的比例更高(P=0.017)，发生疾病复发或转移(P＜0.001)的风险更高，PFS降低(P＜0.001)。<br>　　【结论】<br>　　SIVA1和UBE2A不仅是鼻咽癌放疗抵抗的潜在生物分子标志物，而且可能对患者放疗后临床疗效和疾病进展具有预测意义。初诊时SIVA1positive和UBE2Ahigh表达可以有效预测鼻咽癌患者放疗抵抗。通过治疗前标本检测鼻咽癌放疗抵抗基因SIVA1和UBE2A的表达水平，筛选放疗抵抗且易出现疾病进展的人群，实现个体化治疗，减轻鼻咽癌疾病负担和降低死亡率具有一定的临床意义。