检索历史 清除

摘要目的鼻咽癌（Nasopharyngealcarcinamo,NPC）是最常见的头颈部恶性肿瘤，早期发病隐匿，临床表现多样，恶性程度高，易发生转移。目前认为其发病与遗传因素、EB病毒感染及环境因素有关，但具体的分子机制与调控机制仍未明确。我们应用高通量基因芯片和生物信息学技术检测来比较原发性鼻咽癌和慢性鼻咽炎（chronicnasopharyngitis,CNP）组织中环状RNA（circularRNA,circRNA）的表达水平，研究circRNAs表达水平变化与鼻咽癌发生发展的关系，并预测差异表达（differentiallyexpressed,DE）的circRNAs可能作用的潜在靶基因，包括：微小RNA（microRNA,miRNA）及信使RNA（messengerRNA,mRNA），最后构建其基因调控网络。<br>　　方法收集厦门大学附属中山医院经活检病理确诊的42例活检组织标本，其中原发性鼻咽癌21例、慢性鼻咽炎21例。在两组中各选取6个样本组织进行总RNA的提取、纯化，应用高通量基因芯片技术检测鼻咽癌组织和慢性鼻咽炎组织circRNAs的表达水平。以折叠倍率（FoldChange,FC）作为筛选标准（FC≥1.5，P≤0.05），筛选DEcircRNAs。随机选取4个DEcircRNAs，通过定量逆转录聚合酶链反应（quantitativereversetranscription-polymerasechainreaction,qRT-PCR）技术在21对鼻咽组织中验证基因芯片检测结果的准确性。通过Overlap分析方法从TargetScan和miRanda两个数据库预测鉴定DEcircRNAs可能作用的miRNAs，找出相对应的miRNAs后通过miRanda、miRDB和TargetScan三个数据库找出miRNAs所调控的mRNA，利用Cytoscape软件构建DEcircRNA-miRNA-mRNA的调控网络图。<br>　　结果在鼻咽癌与慢性鼻咽炎组织中，筛选出31个DEcircRNAs（FC≥1.5,P≤0.05），其中包括18个表达上调的circRNAs，13个表达下调的circRNAs。通过qRT-PCR实验对随机选取的DEcircRNAs的进行验证：hsa_CircRNA_104204、hsa_CircRNA_101252、hsa_CircRNA_100160和hsa_CircRNA_001430的表达趋势同芯片检测结果一致。通过Overlap分析鉴定出23个DECircRNAs及其相应的靶基因，其中包括37个miRNAs和50个mRNAs。通过Cytoscape软件构建了差异表达circRNA-miRNA-mRNA的调控网络图及14个鼻咽癌circRNA-miRNA-mRNA分子调控元件。<br>　　结论1.与慢性鼻咽炎组织相比，鼻咽癌组织中存在DEcircRNAs，表明DEcircRNAs可能与鼻咽癌的发生发展相关。2.CircRNA靶基因的预测和调控网络的构建有助于进一步理解鼻咽癌发病的分子机制和调控机制。