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摘要目的：<br>　　肺癌是世界上最常见的恶性癌症之一。表皮生长因子受体（EpidermalGrowthFactorReceptor，EGFR）酪氨酸激酶抑制剂（Tyrosinekinaseinhibitors，TKI）奥希替尼（Osimertinib，OSI），用于具有EGFRT790M突变的肺腺癌患者。雷公藤氯内酯醇（Tripchlorolide,T4）是一种环氧二萜类内酯化合物，从雷公藤中提取。许多研究表明，雷公藤提取物具有许多生物学活性，包括免疫抑制和抗炎作用，且具有很强的抗肿瘤活性。同时雷公藤提取物与化疗药物联合使用时具有协同作用。在这项研究中，我们评估T4和奥希替尼的对肺腺癌H1975细胞的联合作用效应，并研究其可能的机制，为临床非小细胞肺癌的联合治疗方案提供理论依据。<br>　　方法：<br>　　1.H1975细胞培养于含10%胎牛血清和1%青霉素与链霉素(终浓度为100U/mL)的RPMI-1640培养液,常规置于37℃、5%CO2培养箱中,根据细胞生长情况进行消化传代,并取对数生长期细胞实验。<br>　　2.将细胞消化接种于96孔板后，采用CCK8法测定T4和OSI的药物作用浓度，然后根据情况选择合适的药物浓度去干预细胞。<br>　　3.将细胞消化接种于6孔板后，用T4、OSI、T4+OSI作用于细胞2天，或用740YP（PI3K/AKT激活剂）和Caspase抑制剂Z-VAD-FMK（凋亡抑制剂）预处理后，再加入T4、OSI、T4+OSI去干预细胞，提取总蛋白通过WesternBlotting观察凋亡相关蛋白、PI3K/AKT信号通路、EMT蛋白水平的变化。<br>　　4.将细胞消化接种于12孔板后，加入T4、OSI、T4+OSI去干预细胞，结晶紫染色初步观察细胞形态改变，AnnexinV-AP/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡，Hoechst33342/PI染色荧光显微镜观察镜下细胞染色情况。或用740YP、Z-VAD-FMK预处理细胞，再观察上述指标。<br>　　5.将细胞消化接种于Transwell小室上室中，通过加入不同作用浓度的T4、OSI、T4+OSI去干预细胞，多聚甲醛固定，结晶紫染色，显微镜下观察细胞迁移情况，通过计数随机3个视野下的细胞数来评估细胞的迁移情况。<br>　　6.将细胞消化接种于12孔板中，用T4、OSI、T4+OSI作用细胞，或用740YP预处理细胞后再添加T4、OSI、T4+OSI作用细胞，用PE直接偶联的抗PD-L1抗体染色细胞，通过流式细胞仪分析PD-L1阳性率。<br>　　结果：<br>　　1.雷公藤氯内酯醇T4和奥希替尼OSI能够诱导肺腺癌H1975细胞死亡，且两药联合效果更显著。<br>　　2.雷公藤氯内酯醇T4和奥希替尼OSI能够通过凋亡的方式诱导肺腺癌H1975细胞死亡。<br>　　3.雷公藤氯内酯醇T4和奥希替尼OSI可以通过PI3K/AKT通路诱导肺腺癌H1975细胞凋亡。<br>　　4.雷公藤氯内酯醇T4和奥希替尼OSI可以抑制肺腺癌H1975细胞上皮间质转化。<br>　　5.雷公藤氯内酯醇T4和奥希替尼OSI可以下调肺腺癌H1975细胞膜表面PD-L1的表达。<br>　　结论：<br>　　OSI和T4可以促进H1975细胞的死亡，且在T4和OSI联合使用时杀伤效果更强。OSI和T4是通过激活Caspase诱导细胞发生凋亡的方式促进了细胞死亡，且OSI和T4诱导凋亡是通过抑制PI3K/AKT信号通路。我们还发现T4和OSI能够抑制H1975细胞EMT倾向。OSI和T4能够下调细胞膜表面PD-L1的表达，且740YP能部分逆转PD-L1的表达。