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摘要目的：<br>　　本研究以CCl4所致急性肝损伤小鼠为模型，旨在探索α-常春藤皂苷发挥护肝作用的保护机制，为其临床转化提供理论依据。<br>　　方法：<br>　　以50只雄性ICR小鼠为研究对象，随机分为五组：正常组（Con）、模型组（CCl4）、α-常春藤皂苷低（α-Hed-L，40mg?kg-1）剂量组、α-常春藤皂苷高（α-Hed-H，80mg?kg-1）剂量组及联苯双酯（BIF，150mg?kg-1）阳性对照组。小鼠适应性喂养后，皮下注射相应剂量的α-常春藤皂苷溶液进行保护，末次给药后24h，腹腔注射0.2%CCl4溶液（溶于橄榄油），以诱导建立小鼠急性肝损伤模型，收集血清并摘取肝脏用于后续实验。生化法检测小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）和肝组织中超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的活性以及丙二醛（MDA）的含量；使用苏木素-伊红（HE）染色法分析小鼠肝脏的组织病理学变化；使用酶联免疫吸附（ELISA）法检测小鼠血清中炎症因子白介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白介素-6（IL-6）的变化水平；使用蛋白质印迹（WesternBlot）法检测小鼠肝组织中NLRP3炎性小体相关蛋白Nod样受体蛋白3（NLRP3）、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1（Caspase-1）的蛋白表达情况；使用免疫组化石蜡切片染色（IHC-P）法检测小鼠肝组织中NLRP3和MPO的表达情况。使用LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞炎性模型进一步验证α-常春藤皂苷是否通过抑制NLRP3炎性小体的激活发挥抗炎保肝机制。首先采用MTT法分别评估不同浓度的LPS（0、0.5、1.0、2.0、4.0μg?mL-1）和α-常春藤皂苷（0、0.2、0.4、0.8、1.6μmol?L-1）对RAW264.7细胞的毒性，确定合适的造模及给药浓度范围；然后通过ELISA法检测LPS（0、0.25、0.5、1.0μg?mL-1）刺激RAW264.7细胞后IL-1β和IL-18的分泌情况，以确定LPS的最佳造模剂量；WesternBlot法检测α-常春藤皂苷对LPS刺激的RAW264.7炎性细胞模型中NLRP3炎性小体相关蛋白表达的影响。<br>　　结果：<br>　　(1)小鼠血清生化检测指标显示：模型组ALT和AST水平显著升高（P＜0.01），表明成功构建了CCl4诱导的小鼠急性肝损伤模型。α-常春藤皂苷或者联苯双酯预处理后，ALT和AST水平显著下降（P＜0.01），并呈剂量依赖，表明α-常春藤皂苷对CCl4引起的急性肝损伤有保护作用。<br>　　(2)小鼠肝组织HE染色显示：模型组小鼠肝细胞形态改变，肝脏组织结构混乱，细胞间隙扩大，肝小叶中央静脉周围出现炎性细胞浸润现象。而α-常春藤皂苷或联苯双酯预处理后，小鼠肝细胞形态有不同程度恢复，炎性浸润面积明显缩小，肝脏组织结构逐渐趋于正常，组织病理学分析进一步证实了α-常春藤皂苷的肝保护作用。<br>　　(3)小鼠肝组织氧化应激参数显示：模型组小鼠肝组织中MDA含量显著升高，SOD和GSH-Px酶活力显著降低（P＜0.01）；α-常春藤皂苷或联苯双酯预处理后，MDA含量显著下降，SOD和GSH-Px酶活力得到恢复（P＜0.05，P＜0.01）。以上结果表明，α-常春藤皂苷可能通过缓解氧化应激发挥其护肝作用。<br>　　(4)小鼠血清炎症因子指标显示，模型组小鼠血清IL-1β、TNF-α和IL-6水平显著升高（P＜0.01）；α-常春藤皂苷或联苯双酯预处理后，小鼠血清IL-1β、TNF-α和IL-6水平显著降低（P＜0.05，P＜0.01），并呈剂量依赖。这一结果表明，α-常春藤皂苷可能通过降低炎症反应发挥肝保护作用。<br>　　(5)WesternBlot法检测各组肝组织NLRP3炎性小体相关蛋白的表达：发现模型组小鼠肝组织中NLRP3、ASC和Caspase1蛋白质表达量显著上调（P＜0.05）；而α-常春藤皂苷低、高剂量预处理组小鼠NLRP3、ASC和Caspase1蛋白表达水平显著下降（P＜0.05，P＜0.01）。该结果表明，α-常春藤皂苷可以通过抑制NLRP3炎症小体的激活而缓解炎症反应，从而发挥肝保护作用。<br>　　(6)免疫组织化学染色法检测小鼠肝脏组织中NLRP3、MPO蛋白表达情况结果显示，模型组小鼠肝脏组织中NLRP3和MPO表达水平升高；而α-常春藤皂苷低、高剂量预处理可降低NLRP3和MPO表达水平。该结果进一步证实，α-常春藤皂苷能够通过影响NLRP3信号通路来抑制炎症反应。<br>　　(7)MTT实验结果显示，LPS处理浓度为1μg?mL-1时细胞活力在90%以上，因此选择该浓度作为诱发RAW264.7小鼠巨噬细胞模型炎症的剂量；α-常春藤皂苷处理浓度为0.8μmol?L-1时细胞活力在90%以上，因此加药浓度设定为0、0.2和0.8μmol?L-1。RAW264.7炎症细胞同时处理LPS和α-常春藤皂苷24h后，Westernblot结果显示，LPS诱导RAW264.7细胞中NLRP3和Ccaspase1蛋白表达增加，而α-常春藤皂苷处理则可降低这两种蛋白的表达（P＜0.05，P＜0.01）。以上结果表明α-常春藤皂苷可通过抑制NLRP3/ASC/Caspase1信号通路抑制炎症水平。<br>　　结论：<br>　　(1)α-常春藤皂苷可能通过缓解氧化应激发挥其保护肝脏的作用。<br>　　(2)α-常春藤皂苷可能通过抑制炎症反应水平发挥其保护肝脏的作用。<br>　　(3)α-常春藤皂苷可能通过负调控NLRP3/ASC/Caspase1信号通路来抑制炎症反应，继而发挥其肝保护作用。