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摘要目的：建立 UPLC-MS/MS 方法检测比格犬血浆中瑞普替尼的浓度，且研究唑类药物伊曲康唑和伏立康唑在比格犬体内的药代动力学效应；同时建立HPLC-DAD 检测瑞普替尼在比格犬肝微粒体内的浓度的方法，研究唑类药物伊曲康唑和伏立康唑在比格犬肝微粒体内对瑞普替尼代谢的影响。<br>　　方法：1.体内实验：以 6 只比格犬作为实验对象，采用三期自身对照实验设计，分为A、B、C 3组。所有的比格犬在实验前禁食12小时，可以自由饮水。第一期A组空腹给予生理盐水30 min后给药瑞普替尼（5 mg/kg）于比格犬；经过一周药物代谢后，进行第二期 B 组同样的 6 只比格犬，空腹给予伊曲康唑（ITZ，7 mg/kg）30 min后，给药瑞普替尼（5 mg/kg）于比格犬；经过一周的第二次药物代谢后，进行第三期 C 组，同样的 6 只比格犬，空腹给予伏立康唑（VCZ，7 mg/kg）30 min后，给药瑞普替尼（5 mg/kg）于比格犬。根据不同的时间点，采集血浆样本。在碱性条件下用乙酸乙酯进行样本处理，以阿伐替尼（IS1）为内标检测。流动相为0.1%甲酸-乙腈，流速为0.40 mL/min，扫描方法为使用ESI+源的多反应监测，色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C18柱（2.1 mm ×50 mm，1.7μm），柱温为45℃。应用DAS 2.0（Drug And Statistics 2.0）进行药代动力学分析，SPSS 25.0（Statistical Product and Service Solutions）进行统计学分析。<br>　　2.体外实验：建立以瑞普替尼为底物的比格犬肝微粒体体系，唑类抗真菌药物伊曲康唑和伏立康唑为抑制剂。在0.3 mL的孵育体系中，分别加入伊曲康唑（ITZ）和伏立康唑（VCZ），在37℃恒温水浴箱内孵育5 min。加入NADPH启动反应，在孵育40 min后，加入HCl和乙酸乙酯终止反应，加入内标塞利尼索溶液（IS2），对样品进行处理，进行 UPLC-MS/MS 分析检测瑞普替尼浓度。以水-乙腈-0.1 % TFA=28∶52∶20（V/V/V）为瑞普替尼和内标塞利尼索的流动相，流速1 mL/min，色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C18柱（2.1 mm×50 mm，1.7μm）。用GraphPad Prism v 8.0处理计算酶动力学参数Km、Vmax、IC50值。<br>　　结果：（1）体内实验结果显示瑞普替尼在1-1000 ng/mL范围内线性关系良好。精密度、准确度、回收率、基体效应和稳定性均符合指导原则的要求。瑞普替尼与伊曲康唑联合使用后，瑞普替尼的Cmax和AUC0→t分别增加了38.35 %和36.36 %，V和CL相应降低，t1/2延长至7.53 h，P＜0.05，差异具有统计学意义。瑞普替尼和伏立康唑联合使用后，Cmax和AUC0→t分别增加了27.44 %和25.52 %，V和CL相应降低，t1/2延长至7.33 h，P＜0.05，差异具有统计学意义。<br>　　（2）体外实验显示以瑞普替尼为底物的比格犬肝微粒孵育，加入唑类抗真菌药物伊曲康唑和伏立康唑后，抑制了底物瑞普替尼的代谢。ITZ IC50=16.90μg/mL，VCZ IC50=11.62μg/mL。<br>　　结论：本研究首次建立了一种可靠、快速、专属的 UPLC-MS/MS 和 HPLC-DAD 检测比格犬体内外瑞普替尼浓度的方法。该方法具有分析时间短(2.0 min)、线性关系好(1-1000 ng/mL)、回收率高、精密度好、专属性强等优点。根据比格犬体内外结果，瑞普替尼和唑类抗真菌药物联合使用时，唑类药物伊曲康唑和伏立康唑抑制了瑞普替尼的代谢，增加了瑞普替尼的血浆暴露量。所以，在临床上如果使用瑞普替尼与伊曲康唑和伏立康唑联合使用治疗癌症患者时，应该考虑可能发生的多种不同药物之间的相互作用。