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Rab10对磷脂酰丝氨酸翻转酶ATP8A1后高尔基体转运的影响探究

摘要磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine,PS)是真核细胞膜组分中含量最丰富的磷脂,在生物膜上呈不对称分布。PS的跨膜转运是各种细胞功能的基础,与囊泡的出芽与转运、细胞凋亡、信号传导等生理活动密切相关。ATP8A1是磷脂翻转酶P4-ATPase家族的成员之一,能够精确调控PS的转运,当ATP8A1错误定位或功能异常时会直接导致癌症、凝血功能异常、阿尔兹海默症等疾病的发生。<br>  Rab10作为Rab蛋白(Ras-associated binding proteins)家族成员,是细胞内囊泡运输的关键调控因子,目前尚不清楚Rab蛋白是否参与ATP8A1亚细胞定位的调控。本论文以HeLa细胞为研究对象,借助激光共聚焦荧光显微镜,结合免疫荧光等实验方法对Rab10是否影响ATP8A1的正确定位进行了初步探索。首先发现Rab10持续激活会改变ATP8A1的亚细胞定位,使其在近核区聚集。为确认Rab10的持续激活是抑制 ATP8A1 的顺行转运还是促进其逆行转运,本论文引入蛋白可控同步释放(Retention using selective hooks,RUSH)系统控制ATP8A1从高尔基体的同步释放,对ATP8A1的顺行后高尔基体转运及其对PS翻转的影响展开了探究。发现ATP8A1滞留于高尔基体或内质网会对细胞内膜系统的PS分布产生影响,而对质膜上PS的分布没有明显影响。Rab10持续激活能够抑制ATP8A1的后高尔基体转运,但对转铁蛋白受体(Transferrin receptor,TfR)和疱疹性口腔炎病毒糖蛋白(Vesicular stomatitis virusG,VSVG)的转运没有影响。最后通过活细胞实时成像,进一步发现在ATP8A1的后高尔基体出芽囊泡中近半数包含Rab10蛋白,并且Rab7a也定位于ATP8A1的转运囊泡中。<br>  综上所述,本论文主要发现了Rab10作为特异性调控因子参与ATP8A1的后高尔基体转运,对ATP8A1在细胞中正确定位发挥翻转酶活性维持PS在膜两侧的不对称分布具有重要作用。为揭示和解析Rab10在高尔基体-内吞体互作网络中的功能和ATP8A1对内吞途径囊泡运输的影响及机制打下基础。

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