摘要脑出血(intracerebral hemorrhage, ICH)是指没有明显外因情况下的脑内出血,其发病率随着年龄的增加而升高。ICH后血肿周围会出现铁蓄积,且脑内铁蓄积的发生率随着年龄的增加而上升。脑组织中过量的铁蓄积会导致铁死亡及神经细胞死亡。然而,ICH 中铁死亡的机制尚未得到很好的阐明。Ferroportin1 (Fpn)能将细胞内过多的铁转移到细胞外而维持铁稳态。因此,Fpn 的失调在ICH中的铁代谢中起重要作用。然而,Fpn及其信号通路在ICH神经细胞死亡和神经系统功能损伤中的确切作用和潜在的机制尚不清楚,需要进一步探索。<br> 目的:研究铁转运蛋白Fpn及其上游分子miR-124在老年ICH小鼠模型中的作用和机制,以及靶向该通路是否可以减少神经细胞死亡并改善ICH。<br> 方法:使用小鼠自体血构建ICH模型小鼠,通过蛋白免疫印迹(Western blotting, WB)检测Fpn蛋白水平的变化,通过荧光定量多聚核苷酸链式反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction, qPCR)检测Fpn mRNA水平的变化。在Fpn-floxed 小鼠的尾状核中注射 cre 病毒敲低 Fpn,注射 Fpn 的腺相关病毒(adeno-associated virus, AAV)过表达 Fpn,通过神经缺陷评分(Neurological Deficit Scores, NDS)、前肢放置实验、转角测试和转棒实验评估小鼠的神经系统功能;通过苏木素-伊红染色(hematoxylin-eosin staining, HE)、TUNEL染色和普鲁士蓝染色(Prussian blue reaction, Perls staining),检测ICH的血肿、细胞凋亡和铁蓄积,并通过WB和qPCR检测细胞凋亡和铁死亡相关分子的变化。利用网站工具预测调控Fpn的microRNAs(miRNAs),通过荧光素酶报告实验筛选出调控Fpn的miRNA。结合ICH病人的临床症状,与对应血清的miR-124水平作相关性分析。在小鼠的尾状核中注射 miR-124 拮抗剂,并在 Fpn 敲除小鼠的尾状核中注射miR-124的拮抗剂,评估神经系统功能的改变,并检测细胞凋亡和铁死亡。<br> 结果: Fpn在老年ICH模型小鼠和老年ICH患者的脑组织中显著上调。敲除Fpn加重了血肿体积、细胞凋亡、铁死亡和神经系统功能障碍。过表达 Fpn 的老年ICH小鼠显示出这些症状的显著改善。miR-124调控Fpn的转录后修饰。老年ICH患者血清 miR-124 水平降低,且老年 ICH 患者的神经系统功能障碍与其血清miR-124水平具有相关性。使用miR-124拮抗剂增强了Fpn表达并减轻了脑出血、细胞凋亡和铁死亡以及神经系统功能障碍,但在Fpn敲除小鼠中再给予miR-124拮抗剂,则没有上述改善的现象。<br> 结论: miR-124/Fpn信号通路在老年ICH模型小鼠的神经细胞死亡和神经系统功能损伤中起重要作用。Fpn在老年ICH模型小鼠和老年ICH患者出血周围脑组织中表达上调。miR-124可以下调大脑中Fpn的表达。老年ICH患者脑组织和血清中miR-124水平下调,且老年ICH患者的神经系统功能障碍与血清miR-124水平呈正相关。过表达Fpn或抑制miR-124可以缓解老年ICH模型小鼠脑出血、细胞凋亡和铁死亡及神经系统功能障碍。
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