检索历史 清除

摘要研究目标：肝内胆管癌（ICC）具有很高的侵袭性和明显的细胞异质性，因此预后极差，且缺乏有效的治疗方法。前期工作中，在对小鼠ICC组织进行单细胞测序后，通过生物信息学分析筛选出了关键的转录因子ZMIZ1。ZMIZ1在部分癌症中曾被报道，但在ICC中的作用机制尚不清楚。因此，本研究试图通过分子生物学的方法证实ZMIZ1在ICC的发生发展中存在关键作用，并探究该基因影响ICC发生发展的机制。<br>　　研究方法：首先，本研究综合利用生物信息学和分子生物学方法，分析了单细胞测序的结果。其次，在ICC细胞中敲低ZMIZ1后通过Westernblotting、qRT-PCR、平板克隆、EdU、流式细胞术等实验检测细胞的生长、增殖、周期和凋亡情况。接下来，通过构建病毒载体在动物体内敲低或者沉默ZMIZ1，然后观察AKT/NICD能否诱导ICC发生。同时，在小鼠肝脏中过表达AKT和ZMIZ1来观察ICC的发生发展情况。最后通过分析单细胞测序数据筛选ZMIZ1潜在靶基因，并在细胞水平上过表达或者敲低ZMIZ1后，利用定量PCR对靶标表达水平进行了验证。<br>　　研究结果：临床研究大数据显示，与正常组织相比，ZMIZ1在ICC中显著高表达。接着，通过CCK8和细胞平板克隆实验检测结果表明，沉默ZMIZ1之后，ICC细胞的增殖活力明显下降。流式细胞术检测结果表明，在ICC细胞中沉默ZMIZ1诱导细胞周期G2/M期阻滞和细胞凋亡。以上这些结果表明敲低ZMIZ1能够显著抑制ICC细胞的增殖。动物体内的实验结果表明，在裸鼠移植瘤模型和AKT/NICD诱导的原位ICC模型中沉默ZMIZ1显著抑制ICC的肿瘤生<br>　　长。此外，在小鼠中共同过表达AKT与ZMIZ1可以驱动ICC的发生。最后，在ICC中敲低ZMIZ1，Myc的转录和蛋白表达水平降低。相反，过表达ZMIZ1，Myc的表达水平升高。这些结果表明，ZMIZ1与Myc之间存在显著的正调控关系。<br>　　结论：ZMIZ1在人临床ICC样本和细胞中高表达，敲低或者沉默ZMIZ1显著抑制ICC细胞体外生长和体内的发生。此外，ZMIZ1是ICC发生的癌基因，并可以与AKT一起诱导ICC的发生。ZMIZ1受Notch1调控，同时又调控Myc的表达。这些都说明ZMIZ1可以作为ICC的一个潜在靶标。