摘要研究目标:肝内胆管癌(ICC)具有很高的侵袭性和明显的细胞异质性,因此预后极差,且缺乏有效的治疗方法。前期工作中,在对小鼠ICC组织进行单细胞测序后,通过生物信息学分析筛选出了关键的转录因子ZMIZ1。ZMIZ1在部分癌症中曾被报道,但在ICC中的作用机制尚不清楚。因此,本研究试图通过分子生物学的方法证实ZMIZ1在ICC的发生发展中存在关键作用,并探究该基因影响ICC发生发展的机制。<br> 研究方法:首先,本研究综合利用生物信息学和分子生物学方法,分析了单细胞测序的结果。其次,在ICC细胞中敲低ZMIZ1后通过Westernblotting、qRT-PCR、平板克隆、EdU、流式细胞术等实验检测细胞的生长、增殖、周期和凋亡情况。接下来,通过构建病毒载体在动物体内敲低或者沉默ZMIZ1,然后观察AKT/NICD能否诱导ICC发生。同时,在小鼠肝脏中过表达AKT和ZMIZ1来观察ICC的发生发展情况。最后通过分析单细胞测序数据筛选ZMIZ1潜在靶基因,并在细胞水平上过表达或者敲低ZMIZ1后,利用定量PCR对靶标表达水平进行了验证。<br> 研究结果:临床研究大数据显示,与正常组织相比,ZMIZ1在ICC中显著高表达。接着,通过CCK8和细胞平板克隆实验检测结果表明,沉默ZMIZ1之后,ICC细胞的增殖活力明显下降。流式细胞术检测结果表明,在ICC细胞中沉默ZMIZ1诱导细胞周期G2/M期阻滞和细胞凋亡。以上这些结果表明敲低ZMIZ1能够显著抑制ICC细胞的增殖。动物体内的实验结果表明,在裸鼠移植瘤模型和AKT/NICD诱导的原位ICC模型中沉默ZMIZ1显著抑制ICC的肿瘤生<br> 长。此外,在小鼠中共同过表达AKT与ZMIZ1可以驱动ICC的发生。最后,在ICC中敲低ZMIZ1,Myc的转录和蛋白表达水平降低。相反,过表达ZMIZ1,Myc的表达水平升高。这些结果表明,ZMIZ1与Myc之间存在显著的正调控关系。<br> 结论:ZMIZ1在人临床ICC样本和细胞中高表达,敲低或者沉默ZMIZ1显著抑制ICC细胞体外生长和体内的发生。此外,ZMIZ1是ICC发生的癌基因,并可以与AKT一起诱导ICC的发生。ZMIZ1受Notch1调控,同时又调控Myc的表达。这些都说明ZMIZ1可以作为ICC的一个潜在靶标。
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