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摘要目的：<br>　　胃癌是全世界第五大最常见的肿瘤，尽管近年来取得了不少诊断和治疗进展，但其5年生存率仍不到30%。大多数患者在确诊时已属于进展期，早期缺乏有效的诊断指标是该疾病患者生存不佳的主要原因之一。最近的研究表明，环状RNA（circularRNAs,circRNA）在细胞生长、分化、增殖和侵袭转移中发挥多种生物学功能，在多种癌症发生发展中发挥着十分重要的作用，而circRNAs在胃癌进展过程中的作用尚不明确。本研究旨在探究胃癌侵袭转移的关键分子及其调控机制。<br>　　方法：<br>　　通过对GEO和ArrayExpress等高通量数据库的检索，找出胃癌相关的circRNA芯片表达数据，运用芯片meta分析方法分析出在胃癌中表达差异显著的circRNAs。通过实验的进一步验证，最终选择hsa_circ_0003763（circGSK3B）作为本研究的研究主角。收集胃癌患者肿瘤和癌旁组织样本，分析circGSK3B在胃癌组织的表达情况及其与性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤定位、淋巴结转移、TNM分期和血管侵袭等因素之间的关系。运用实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）技术检测主要分子在胃癌组织和细胞的转录水平。利用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）及DNASanger测序检测环状RNA的存在及其环化特征。采用荧光原位杂交实验（FISH）检测了circGSK3B的核定位。通过构建circGSK3B的短发卡RNA（shorthairpinRNA，shRNA）和过表达质粒并用慢病毒包装起来，下调或上调胃癌细胞中的circGSK3B的水平。使用MTT和克隆形成实验测定细胞的增殖能力和迁移能力，transwell实验来观测细胞侵袭迁移的能力。采用用流式细胞术检测了胃癌细胞在过表达circGSK3B后细胞周期和细胞凋亡的分布情况。通过异种肿瘤移植模型，将转染了过表达circGSK3B的病毒细胞注射到小鼠皮下，观察circGSK3B对细胞增殖和迁移能力的影响。<br>　　为进一步探索circGSK3B介导胃癌侵袭转移的作用机制，使用RNA-pulldown和质谱技术来寻找circGSK3B的潜在结合蛋白并用RNA免疫共沉淀（RIP）技术做进一步的验证。使用qRT-PCR和westernblot来评估EZH2和RORA在敲低和过表达circGSK3B细胞中信使RNA和蛋白表达水平。利用FISH实验观察circGSK3B与EZH2的共定位情况。构建带Flag和GST标签的过表达及4种突变表达载体，探究circGSK3B与EZH2的具体结合位置。染色质免疫共沉淀（CHIP）实验用来证明转录因子EZH2/H3K27me3与RORA启动子区域结合情况。通过Kaplan-Meier生存曲线分析了EZH2和RORA的表达与预后的相关性。运用皮尔森相关系数（pearson）分析了circGSK3B，EZH2和RORA三者之间的关系。<br>　　结果：<br>　　对6个胃癌circRNA芯片数据进行meta分析筛选出14个潜在的差异circRNAs，经过RT-PCR，sanger测序，组织和细胞验证的多重筛选之后发现只有circGSK3B确实存在于胃癌细胞中并在胃癌组织和细胞中表达一致。qRT-PCR结果显示circGSK3B在胃癌细胞和组织中表达下调。体内外实验结果显示，circGSK3B主要发挥抗肿瘤效应；过表达circGSK3B可以显著抑制胃癌细胞的增殖侵袭转移和克隆形成能力，诱导胃癌细胞的凋亡。CircGSK3B主要定位于细胞核。机制研究表明，circGSK3B可以与EZH2的D2结构域（200-350AA）相互结合，导致EZH2和H3K27me3与RORA启动子的结合减少，进而促进RORA的表达和抑制β-catenin入核，最终抑制胃癌的进展。临床数据还发现，EZH2与circGSK3B和RORA表达呈显著负相关，而circGSK3B与RORA表达呈正相关关系。<br>　　结论：<br>　　circGSK3B在胃癌中是一个抑癌基因，通过结合EZH2减弱EZH2对RORA的反式抑制作用，进而抑制β-catenin入核，最终抑制胃癌的侵袭转移。本研究表明circGSK3B/EZH2/RORA轴可作为新的胃癌肿瘤标志物和治疗靶点。