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摘要【研究背景及目的】<br>　　代谢性炎症是一种慢性低度炎症，是肥胖发生代谢紊乱的核心环节之一。巨噬细胞是代谢性炎症产生和持续的关键。持续的代谢性炎症与2型糖尿病（Type2DiabetesMellitus，T2DM）、代谢相关脂肪性肝病（Metabolicassociatedfattyliverdisease，MAFLD）和心血管疾病等肥胖并发症密切相关。既往有研究证实，MicroRNA-29a（miR-29a）与巨噬细胞促炎性极化相关，但其在肥胖及其相关代谢紊乱中的研究较少。本研究探究miR-29a对肥胖及其相关代谢紊乱的影响及机制。<br>　　【研究方法】<br>　　建立高脂饮食（Highfatdiet，HFD）诱导肥胖小鼠模型，实时定量PCR（Quantitativereal-timePCR，qPCR）检测小鼠肝脏、肌肉和脂肪等重要代谢组织中miR-29a的表达变化。<br>　　构建miR-29a过表达小鼠，HFD喂养野生型（Wildtype，WT）和miR-29a过表达小鼠，记录小鼠体重变化和饮食摄入情况。检测小鼠空腹血脂、血糖和胰岛素，计算胰岛素抵抗指数（Homeostaticmodelassessmentforinsulinresistance，HOMA-IR），并对小鼠进行糖耐量测试（Glucosetolerancetest，GTT）和胰岛素耐量测试（Insulintolerancetest，ITT）。检测小鼠血清中谷丙转氨酶（Alanineaminotransferase，ALT）、谷草转氨酶（Aspartateaminotransferase，AST）和乳酸脱氢酶（Lactatedehydrogenase，LDH）以评价小鼠肝脏功能。检测小鼠肝脏和脂肪组织的重量和体重比，HE和免疫组化染色检测小鼠肝脏和脂肪组织的病理改变，油红染色观察小鼠肝脏脂质沉积情况。<br>　　qPCR和免疫印迹实验（WesternBlot，WB）检测肝脏组织CD36的表达变化。WB检测腺苷酸活化蛋白激酶（AMPactivatedproteinkinase，AMPK）和磷酸化AMPK（p-AMPK）等分子的变化，检测Toll样受体4（Toll-likereceptor4，TLR4）及其下游髓样分化因子88（Myeloiddifferentiationfactor88,MyD88）、核因子κB（Nuclearfactor-κB，NF-κB）、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38-mitogen-activatedproteinkinase，p38）、c-Jun氨基末端激酶（c-JunN-terminalkinase，JNK）、细胞外信号调节激1/2（Extracellular-signa1regulatedkinase，ERK1/2）和NOD样受体蛋白3（NOD-likereceptorsprotein3，NLRP3）信号通路活化。qPCR检测附睾脂肪组织CD36、脂肪酸合成酶（Fattyacidsynthase，FASN）和炎症因子的表达。<br>　　建立蛋氨酸胆碱缺乏饮食（Methionineandcholinedeficient，MCD）诱导的肝脏代谢性炎症小鼠模型，记录小鼠体重变化情况，检测小鼠空腹血脂、血糖和胰岛素以及ALT、AST和LDH。HE和免疫组化观察小鼠肝脏组织脂质沉积和炎症的情况，qPCR和WB检测肝脏组织CD36的表达变化，WB检测AMPK活化和TLR4及其下游MyD88、NF-κB、p38、JNK、ERK1/2及NLRP3信号通路的活化。<br>　　【结果】<br>　　HFD小鼠肝脏、肌肉和肩胛区棕色脂肪组织miR-29a表达无变化，附睾脂肪组织和腹股沟脂肪组织miR-29a表达下降。<br>　　与HFD喂养的WT（WT-HFD）小鼠相比，HFD喂养的miR-29a过表达（miR-29a-HFD）小鼠体重无变化，其空腹血糖水平降低，HOMA-IR、GTT和ITT改善；肝重减轻，肝脏脂质沉积减少，肝脏功能改善，炎性细胞浸润减少；附睾脂肪组织重量增加，炎性细胞浸润减少。<br>　　与WT-HFD小鼠相比，miR-29a-HFD小鼠肝脏和附睾脂肪组织CD36表达减少；肝脏组织AMPK活化增多，FASN表达减少，TLR4-MyD88信号通路受到抑制，NF-κB、p38、ERK1/2信号通路和NLRP3炎性小体活化减少；附睾脂肪组织FASN表达升高，TLR4及下游趋化因子CC基序配体2（C-Cmotifchemokineligand2，CCL2）和肿瘤坏死因子-α（Tumornecrosisfactoralpha，TNF-α）等炎性因子表达水平下降。<br>　　与MCD饮食的WT（WT-MCD）小鼠相比，miR-29a过表达的MCD饮食（miR-29a-MCD）小鼠肝脏脂质沉积无改变，肝脏炎症减轻。miR-29a-MCD小鼠肝脏组织CD36的表达下降，AMPK活化增多，但FASN表达无差异。miR-29a过表达抑制MCD饮食小鼠肝脏TLR4下游p38和NLRP3信号通路活化。<br>　　【结论】<br>　　HFD可以抑制小鼠脂肪组织miR-29a的表达。miR-29a过表达不改变HFD小鼠的体重，但可以改善糖脂代谢和胰岛素抵抗，减轻肝脏脂质沉积，减少肝脏和脂肪组织炎性细胞浸润，改善肝脏和脂肪组织代谢性炎症。进一步研究发现，这些机制可能与miR-29a过表达通过抑制CD36的表达改善脂质沉积介导的代谢性炎症的作用密切相关：miR-29a过表达可以抑制HFD小鼠肝脏脂质合成，但对MCD饮食小鼠无影响，也增加了HFD小鼠附睾脂肪的脂质合成；miR-29a过表达抑制HFD和MCD小鼠肝脏组织TLR4-MyD88信号通路，减少下游p38和NLRP3信号通路的激活，改善脂质沉积介导的代谢性炎症，也可以抑制HFD小鼠附睾脂肪组织TLR4及其下游炎性因子表达，改善脂肪组织代谢性炎症。