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摘要第一部分黄芩苷通过调控Nrf2及MAPK信号通路改善糖尿病肾脏病氧化应激和炎症反应损伤<br>　　目的：探讨黄芩苷（Baicalin，BAI）通过调控红系衍生核因子2相关因子2（Nuclearfactorerythroid-derived2-relatedfactor2，Nrf2）及丝裂原活化蛋白激酶（Mitogen-activatedproteinkinase，MAPK）信号通路改善糖尿病肾脏病（Diabetickidneydisease，DKD）氧化应激和炎症反应损伤的作用机制。<br>　　方法：采用7周龄雄性db/db小鼠作为糖尿病肾脏病模型，随机分组，将db/db小鼠分为模型组和BAI治疗组，同窝db/m小鼠作为正常对照。BAI干预8周，检测小鼠体重、空腹血糖（Fastingbloodglucose，FBG）、胰岛素，行葡萄糖耐量试验（Glucosetolerancetest，GTT）及胰岛素耐量试验（Insulintolerancetest，ITT）。记录小鼠24h尿量，检测尿微量白蛋白、尿液及血肌酐、血尿素氮（Bloodureanitrogen，BUN）等指标。采用过碘酸-希夫染色（Periodicacid–schiff，PAS）、Masson染色观察肾小球病理改变，透射电镜（Transmissionelectronmicroscopy，TEM）和扫描电镜（Scanningelectronmicroscopy，SEM）进行肾小球超微结构观察。原位末端转移酶标记（TerminaldeoxynucleotidyltransferasedUTPnickendlabeling，TUNEL）技术染色及凋亡相关蛋白检测评估肾脏中细胞凋亡水平。生化试剂盒检测超氧化物歧化酶（Superoxidedismutase，SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathioneperoxidase，GSH-PX）、过氧化氢酶（Catalase，CAT）和丙二醛（Malonaldehyde，MDA）等氧化应激指标。免疫组化法检测炎细胞浸润，实时定量聚合酶链反应（Real-timequantitativepolymerasechainreaction，RT-qPCR）检测促炎细胞因子IL-1β、IL-6、MCP-1、TNFα的mRNA水平。WesternBlot法检测Nrf2、HO-1、NQO-1的蛋白表达水平。肾脏转录组学测序阐明BAI的抗炎机制，再通过WesternBlot法检测p-JNK、JNK、p-P38、P38、p-Erk1/2和Erk1/2的蛋白表达水平进行最终验证。<br>　　结果：BAI可有效改善DKD小鼠的糖代谢、蛋白尿、肾脏组织病理学改变以及细胞凋亡。BAI干预显著升高了肾脏SOD、GSH-PX和CAT的水平，并降低了MDA的水平。同时，BAI干预明显抑制了T细胞、辅助型T细胞、中性粒细胞及巨噬细胞等炎细胞浸润，以及促炎细胞因子IL-1β、IL-6、MCP-1和TNFα的表达。随后，WesternBlot发现BAI显著激活了Nrf2抗氧化信号通路，增加了下游抗氧化酶HO-1、NQO-1的表达。肾脏转录组学研究显示，抑制MAPK信号通路可能介导了BAI的抗炎活性。WesternBlot验证发现BAI确实显著抑制了促炎信号通路MAPK家族的激活，降低了Erk1/2、JNK和P38的磷酸化水平。<br>　　结论：BAI可通过改善氧化应激和炎症反应来治疗DKD，其潜在机制与激活Nrf2介导的抗氧化信号通路和抑制MAPK介导的炎症信号通路有关。<br>　　第二部分基于PI3K/Akt信号通路探讨黄芩苷改善足细胞氧化应激和炎症反应损伤的分子机制<br>　　目的：探讨BAI改善棕榈酸（Palmiticacid，PA）诱导的体外足细胞损伤模型的潜在作用及其分子机制。<br>　　方法：首先采用细胞毒性实验确定黄芩苷干预的合适浓度。检测足细胞标志蛋白Podocin、Desmin来评估BAI对足细胞损伤的作用，TEM观测各组足细胞的凋亡状态。采用H2DCFDA探针染色法检测BAI对足细胞氧化应激损伤的改善作用，同时WesternBlot法检测Nrf2、HO-1、NQO-1的蛋白表达水平。RT-qPCR检测足细胞促炎细胞因子IL-1β、IL-6、MCP-1和TNFα的mRNA水平。通过转录组学阐明BAI的抗炎及抗氧化应激作用可能与调控PI3K/Akt信号通路有关，WesternBlot法检测p-Akt、Akt、p-GSK3β、GSK3β信号及炎症反应相关的p-JNK、JNK、p-ASK1、ASK1的蛋白表达水平加以验证。<br>　　结果：BAI干预显著改善了PA诱导的足细胞损伤及凋亡，增加了Podocin表达水平，降低了Desmin表达水平。BAI显著抑制了足细胞内活性氧簇（Reactiveoxygenspecies，ROS）的积累，增加了Nrf2、HO-1、NQO-1的蛋白表达水平，改善了氧化应激。同时，BAI干预抑制了促炎细胞因子IL-1β、IL-6、MCP-1和TNFα的表达。转录组学结果显示，PI3K/Akt信号可能作为BAI改善氧化应激及炎症反应的共同上游信号。WesternBlot验证发现BAI显著上调了p-Akt、p-GSK3β的蛋白表达，下调了炎症相关信号p-JNK、p-ASK1的蛋白表达。<br>　　结论：BAI可改善PA诱导的足细胞损伤模型中氧化应激及炎症反应，从而发挥足细胞保护作用。其分子机制可能与BAI激活PI3K/Akt信号通路，进而增强Nrf2抗氧化信号、抑制MAPK炎症信号相关。