检索历史 清除

摘要第一部分<br>　　目的随着人们物质生活水平的提高，肥胖的发生率呈逐年上升的趋势，与此同时，妊娠期肥胖的发病率也显著增加。妊娠期肥胖不仅会危害孕母健康，导致妊娠期糖尿病、先兆子痫等短期并发症，还会对子代的肥胖易感性、胰岛素敏感性等产生长期影响，使子代在成年后发生代谢性疾病的风险增加。根据体重增加发生的时期，妊娠期肥胖可分为孕前肥胖和孕期增重过多（excessivegestationalweightgain，EGWG）。研究表明，EGWG是子代不良健康影响的独立危险因素。而目前关于EGWG对子代肝脏脂质代谢影响的研究较少，亦缺乏通用的EGWG的动物模型。为了探讨EGWG对子代代谢的影响，本部分研究构建了EGWG的大鼠模型，并探究了EGWG对胎鼠肝脏脂质代谢的影响及其中的可能机制。<br>　　方法健康Sprague-Dawley（SD）大鼠，雌性16只，雄性8只，适应性喂养一周后，按雌雄2∶1合笼验孕，显微镜观察到精子视为孕0.5天。孕鼠随机分为正常饮食（normaldiet，ND）组和高脂饮食（high-fatdiet，HFD）组，ND组给予正常饮食，HFD组给予60%高脂饮食。记录孕鼠孕期体重。于孕21.5天行剖宫产手术，记录胎鼠出生体重。苏木素-伊红（hematoxylin-eosin，HE）染色、油红O染色观察孕鼠、胎鼠肝脏脂质沉积，甘油磷酸氧化酶-过氧化物酶（glycerolphosphateoxidase-peroxidase，GPO-PAP）法检测孕鼠、胎鼠肝脏与血清甘油三酯（triglyceride，TG）、胆固醇（totalcholesterol，TC）水平，实时荧光定量聚合酶链反应（real-timepolymerasechainreaction，RT-PCR）和Westernblot检测胎鼠肝脏脂质代谢关键基因FASN、SREBP1c、SREBP2、CPT1a的mRNA表达水平和蛋白表达水平。<br>　　结果HFD组与ND组大鼠孕前体重无差异，孕期体重及孕期增重差异逐渐明显。孕21.5天，HFD组孕鼠体重、孕期增重、胎鼠体重[（467.75±22.05）g、（181.50±9.68）g、（5.51±0.17）g]均较ND组[（430.88±18.80）g、（148.50±10.86）g、（4.85±0.35）g]显著增加（Plt;0.05）。HE染色、油红O染色均提示HFD组孕鼠、胎鼠肝脏脂质沉积加重。HFD组孕鼠肝脏TG、TC含量分别较ND组升高3.09倍、2.08倍，血清TG、TC含量分别较ND组升高3.44倍、1.23倍；HFD组胎鼠肝脏TG、TC含量分别较ND组升高2.98倍、1.52倍，血清TG、TC含量分别较ND组升高1.52倍、1.44倍（Plt;0.05）。RT-PCR和Westernblot结果显示，HFD组胎鼠肝脏脂质代谢关键基因FASN、SREBP1c、SREBP2的mRNA和蛋白表达水平均较ND组显著升高，HFD组胎鼠肝脏CPT1a的mRNA和蛋白表达水平均较ND组显著降低（Plt;0.05）。<br>　　结论孕期21天HFD可成功构建EGWG的动物模型，孕鼠EGWG可导致胎鼠肝脏脂质沉积，其机制可能与胎鼠肝脏脂质代谢关键基因FASN、SREBP1c、SREBP2、CPT1a的表达改变有关。<br>　　第二部分<br>　　目的在代谢研究中，干预的时机不同，可导致后代不同的表型。研究表明，在妊娠早期、妊娠晚期等不同的发育窗口，母体肥胖对后代肥胖、代谢等有独立的编程效应。通过对母鼠不同时期的高脂饮食干预，检测仔鼠不同时期的糖脂代谢水平，明确不同时期高脂饮食对子代的具体影响，以期为妊娠期肥胖的研究提供基础，具有重要的现实意义。为了明确孕前、孕后高脂饮食干预对子代糖脂代谢的影响差异，本研究通过在孕前和/或孕期哺乳期给予SD大鼠高脂饲料喂养，构建妊娠期肥胖动物模型，观察子代糖脂代谢的差异情况，并探讨其中的可能机制。<br>　　方法健康SD大鼠，雌性36只，雄性18只，根据孕前及孕期哺乳期饮食的不同，雌性SD大鼠随机分为4组：CC组（孕前、孕期哺乳期均正常饮食）、HC组（孕前高脂饮食、孕期哺乳期正常饮食）、CH组（孕前正常饮食、孕期哺乳期高脂饮食）、HH组（孕前、孕期哺乳期均高脂饮食），子代断奶后，全部给予正常饮食。记录母鼠孕前、孕期体重及仔鼠体重。取出生时（0周）、幼年时（3周）、成年时（12周）雄性仔鼠，血糖仪检测空腹血糖（glucose，GLU）水平，酶联免疫吸附测定（enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELISA）试剂盒检测空腹胰岛素（insulin，INS）水平，计算胰岛素抵抗指数（homeostasismodelassessmentofinsulinresistance，HOMA-IR），葡萄糖耐量试验（glucosetolerancetest，GTT）、胰岛素耐量试验（insulintolerancetest，ITT）检测糖耐量、胰岛素敏感性，并计算GTT、ITT的曲线下面积（areaunderthecurve，AUC），GPO-PAP法检测肝脏TG、TC水平，HE染色、油红O染色观察肝脏脂质沉积，RT-PCR和Westernblot检测肝脏糖代谢通路关键基因IR、IRS、AKT及脂质代谢关键基因FASN、SCD1、SREBP1c和Wnt信号通路关键基因LRP6、β-catenin、TCF4的mRNA表达水平和蛋白表达水平。<br>　　结果孕前高脂饮食的HC组[（320.00±12.39）g]、HH组[（315.56±8.60）g]大鼠孕前体重较孕前正常饮食的CC组[（287.11±8.65）g]、CH组[（281.56±7.76）g]显著增高，差异有统计学意义（Plt;0.05）。孕前和/或孕期高脂饮食的HC组[（176.00±11.69）g]、CH组[（178.22±10.41）g]、HH组[（188.67±6.06）g]母鼠孕期增重较孕前孕期均正常饮食的CC组[（160.33±8.86）g]显著增加（Plt;0.05）。出生时，HC组、CH组、HH组的新生仔鼠出生体重均较CC组显著增加（Plt;0.05），其中HH组新生仔鼠出生体重最大。CH组、HH组新生仔鼠肝脏TG、TC含量，FASN、SREBP1c的mRNA及蛋白表达水平，SCD1的蛋白表达水平均较CC组显著增加（Plt;0.05），肝脏脂质沉积加重；HH组的肝脏TG含量及FASN、SCD1的蛋白表达水平较其他三组均显著增高（Plt;0.05）。四组的空腹GLU、INS水平、HOMA-IR指数及IR、IRS、AKT、LRP6、β-catenin、TCF4的mRNA及蛋白表达水平均未见显著性差异（Pgt;0.05）。3周时，HC组、CH组、HH组的仔鼠体重、肝脏TG、TC含量，FASN、SCD1、SREBP1c的mRNA及蛋白表达水平均较CC组显著增加（Plt;0.05），肝脏脂质沉积增加，其中HH组增加最显著；HH组的空腹GLU、INS水平、HOMA-IR指数、GTT-AUC、ITT-AUC及肝脏p-IRS的蛋白表达水平均较CC组显著增加，肝脏IR、IRS、LRP6、β-catenin、TCF4的mRNA及蛋白表达水平均较CC组显著降低（Plt;0.05）。12周时，HC组、CH组、HH组的仔鼠体重、空腹GLU、INS水平、HOMA-IR指数、GTT-AUC、ITT-AUC、肝脏TG、TC含量、p-IRS的蛋白表达水平，以及FASN、SCD1、SREBP1c的mRNA及蛋白表达水平均较CC组显著增加（Plt;0.05），肝脏脂质沉积增加；三组IR、IRS、AKT、LRP6、β-catenin、TCF4的mRNA表达水平均较CC组显著降低，IR、IRS、p-AKT、LRP6、β-catenin、TCF4的蛋白表达水平均较CC组显著降低，p-IRS的蛋白表达水平较CC组显著增加（Plt;0.05）。<br>　　结论孕前和/或孕期哺乳期高脂饮食均可成功构建妊娠期肥胖动物模型；孕前孕期哺乳期全程高脂饮食对子代糖脂代谢影响最大；孕前高脂饮食与孕期高脂饮食的大鼠比较，孕期高脂饮食对新生子代的脂代谢影响更显著，两种干预方式对幼年时、成年时的仔鼠影响未见显著性差异；孕前高脂饮食的大鼠，即使孕期哺乳期更换为正常饮食，其对子代的不利影响仍然存在；高脂饮食的子代首先表现出脂代谢异常，后出现糖代谢异常；高脂饮食对子代糖代谢的影响考虑与糖代谢通路基因及Wnt信号通路基因的表达改变有关，高脂饮食对子代脂代谢的影响考虑与脂质代谢关键基因的表达改变有关。