检索历史 清除

摘要目的：研究吗啡耐受形成过程中脊髓Toll样受体2型（Toll-likereceptors2,TLR2）与褪黑素（melatonin）的相互作用，及其调控下游NOD样受体热蛋白结构域相关蛋3型（NOD-likereceptorthermalproteindomainassociatedprotein3,NLRP3）炎症小体与小胶质细胞激活的分子机制。<br>　　方法：本研究选用体重为220~250g雄性SD大鼠，编号后随机分组，通过鞘内给予吗啡以及相应的药品，包括：CU-CPT22、褪黑素和米诺环素。每天早晚两次（8:00am和5:00pm）持续7天，制备吗啡耐受模型。在开始给药后的第1、3、5、7天早晨给药后应用甩尾实验测定大鼠甩尾延长时间，计算最大镇痛效能（maximalpossibleantinociceptiveeffect,%MPE）。于给药第7天上午测痛结束后处死大鼠，取脊髓腰膨大部分，分别采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）、蛋白免疫印记法（Westernblot，WB）、酶联免疫吸附实验（ELISA），检测吗啡耐受模型组以及给予相应药品后，大鼠脊髓中TLR2、NLRP3、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1（cysteinylaspartatespecificproteinase-1,Caspase-1）、白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）、离子钙结合适配器分子1型（ionizedcalciumbindingadaptermolecule1,Iba1）的表达变化。<br>　　结果：（1）吗啡耐受组大鼠在第7天成功构建吗啡耐受模型，反复给予吗啡导致TLR2、Caspase-1、IL-1β、Iba1的mRNA和蛋白的表达均上调，NLRP3mRNA的表达上调；（2）TLR2抑制剂可以延缓吗啡耐受的产生，且CU-CPT22抑制了吗啡导致的TLR2、Caspase-1、IL-1β、Iba1表达上调。吗啡耐受组大鼠脊髓中褪黑素的水平明显降低，吗啡耐受大鼠同时给予CU-CPT22则可维持褪黑素的水平；（3）褪黑素可以延缓吗啡耐受的产生，且qRT-PCR结果显示褪黑素可抑制吗啡导致的TLR2、NLRP3mRNA表达上调，Westernblot结果显示褪黑素可抑制吗啡导致的TLR2、Caspase-1、IL-1β、Iba1蛋白表达上调。（4）米诺环素可以延缓吗啡耐受的产生。qRT-PCR结果显示米诺环素可抑制吗啡导致的TLR2、NLRP3mRNA表达上调，Westernblot结果显示米诺环素可抑制脊髓中Iba1、Caspase-1、IL-1β蛋白的表达。<br>　　结论：在中枢神经系统，脊髓中可能存在TLR2-褪黑素反馈环路，通过激活小胶质细胞与NLRP3炎症小体导致吗啡耐受的形成。