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摘要目的：（1）从GenBank数据库中筛选pmMsrA、pmMsrB同源蛋白，获得在高底物浓度下具有高效制备手性亚砜活性的Msr蛋白；（2）对同源蛋白ppMsrA进行定向进化改造尝试增强酶的底物耐受浓度和热稳定性。<br>　　方法：分别以pmMsrA和pmMsrB蛋白序列为模板，利用BLAST在线工具进行比对，从GenBank数据库中选择几个同源性不等的Msr同源蛋白，进行序列合成并构建重组质粒后，IPTG诱导表达重组蛋白。针对pmMsrB同源蛋白，利用整细胞催化反应分析它们制备(S)-亚砜的活性。接着检测同源蛋白akMsrB的最适反应条件，探究它对(S)-甲基对甲苯亚砜和(R)-甲基对甲苯亚砜的相对活性以及底物耐受浓度。针对pmMsrA同源蛋白，诱导后提取粗酶，在不同pH值、温度下检测它们的最适反应条件，分析它们制备(R)-亚砜的活性，接着设计不同浓度（100-350mM）的不同底物，检测活性最好的paMsrA的底物耐受浓度和底物普适性。对同源蛋白ppMsrA，通过一步式PCR建立饱和突变体库，然后建立高通量筛选方法，筛选出底物耐受浓度、温度稳定性提高的突变体。<br>　　结果：（1）以8种不同亚砜作为底物，对pmMsrB同源蛋白制备(S)-亚砜的活性进行分析，得到了催化活性最佳的同源蛋白akMsrB。（2）以甲基苯基亚砜为底物通过条件优化确定了akMsrB的最适pH为7.0，最适温度为35℃。（3）在最适反应条件下探究akMsrB对(S)-甲基对甲苯亚砜和(R)-甲基对甲苯亚砜的相对活性，验证了它的对应选择性实际上可能更好。它可以在底物浓度高达50mM的情况下，制备ee值为98％的(S)-甲基对甲苯亚砜。（4）以甲基苯基亚砜为底物通过条件优化确定了pmMsrA同源蛋白的最适pH为8.0，最适温度为30℃。（5）在最适反应条件下，分析了pmMsrA同源蛋白制备(R)-亚砜的活性，得到了活性最好的同源蛋白paMsrA。（6）在最适反应条件下，它可以催化底物浓度高达320mM（45g/L）的甲基苯基亚砜，以高对映体选择性（E＞200）实现ee＞99%，产率约50%（理论最佳产率）的(R)-甲基苯基亚砜的动力学拆分。（7）在100mM底物浓度下，实现了11种ee＞99%，产率接近50%的R构型的芳香族亚砜的动力学拆分。（8）以11个差异氨基酸为突变位点构建了11个饱和突变体库，根据B-factor分析，构建了2个饱和突变体库，并对这11个突变体库进行了底物耐受初步筛选、13个突变体库进行了热稳定性的初步筛选。<br>　　结论：本课题从GenBank数据库中分别选择了六种同源性较高的pmMsrB和五种同源性较高的pmMsrA同源蛋白，最终得到了来自Acdocovoraxsp.KKS102的MsrB蛋白（命名为akMsrB），实现了在50mM底物浓度下高效制备(S)-亚砜；而来自Pseudomonasalcaliphila的MsrA蛋白（命名为paMsrA），实现了在320mM的底物浓度下高效制备(R)-亚砜，通过普适性的考察，表明它们可高效制备一系列的芳香族(S)-亚砜或(R)-亚砜；最后成功建立了13个饱和突变文库，并完成了初步筛选。