摘要为了更好地发掘野马追的药用价值,本论文主要研究了野马追总黄酮的提取工艺、分离纯化、结构鉴定及固体分散体的制备,旨在为开发出有效成分明确、活性含量较高、质量稳定可控的新药奠定基础。<br> 本论文的主要研究内容与结论如下:<br> 1. 采用响应面试验优化超声破碎法提取野马追总黄酮的工艺条件。首先,通过单因素实验探究各个因素对野马追总黄酮得率的影响。其次,在单因素实验的基础上,采用响应面设计实验优化提取工艺,最终确定优化工艺参数为:料液比1:22.5 g/mL,乙醇体积分数70.12%,提取时间30.5 min,提取功率305.44 W,在此条件下,野马追总黄酮得率可以达到2.86%。实际工艺验证得到的总黄酮得率为2.77%。<br> 2. 采用XAD-16型大孔树脂对野马追总黄酮进行分离与纯化研究。通过静态吸附考察XAD-16、NKA、NKA-9、ADS-F8四种大孔树脂对野马追总黄酮的吸附和解析效果,筛选出适合野马追总黄酮分离纯化的XAD-16型大孔树脂。通过动态吸附优化,得到XAD-16树脂对野马追总黄酮的纯化条件为:上样浓度4.0 mg/mL,上样流速2.0 mL/min,上样pH=5.14,上样量3个柱体积,洗脱工艺为:乙醇浓度70%,洗脱流速4 mL/min。在此工艺条件下,纯化后黄酮含量为82.5%,较纯化前提高了6.25倍。再结合UV、FTIR、LC-MS法对纯化得到的黄酮行进结构鉴定。由UV图得出该类物质属于黄酮类,由LC-MS法鉴定出7种黄酮类化合物,分别为:矢车菊-3,5-二葡萄糖苷、矢车菊素-3-葡萄糖-5-芹糖苷、飞燕草素-3-鼠李糖-5-二葡萄糖苷、飞燕草素-3-葡萄糖-5-葡萄糖醛酸苷、飞燕草素-3,5-O-二葡萄糖葡萄糖苷、原花色素三聚体和原花色素二聚体。<br> 3. 测定了纯化后黄酮的抗氧化、抑菌和抑制肿瘤活性。利用分光光度法,以Vc为对照,研究了对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基、超氧(O2''-)自由基、羟基自由基的清除率和对Fe3+还原能力的测定。结果说明,野马追黄酮去除DPPH自由基的能力较好,清除率可达到82%;野马追黄酮对O2''-自由基的清除率最高可达到85.6%;在清除羟基自由基的试验中,野马追黄酮对其清除率最高为79.8%。在测定Fe3+的还原能力时,纯化黄酮组分的还原能力大于Vc的还原能力,且在浓度为1.6 mg/mL时,纯化黄酮组分的清除率比Vc的大16%,这都表明野马追纯化黄酮组分具有较强的抗氧化能力。使用50mg/mL的黄酮组分对大肠杆菌、白色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、乙型副伤寒沙门氏菌和酵母菌的抑菌圈直径分别为:11.6、24.3、12.5、9.8、12.5 mm,说明该浓度下黄酮对选用菌株均有一定的抑菌活性。采用MTT法测定其抑制肿瘤活性时,当黄酮组分浓度为200 μg/mL时,抑制率可达50%以上,说明对Hela细胞的抑制作用显著。<br> 4. 野马追黄酮固体分散体的初步研究。采用溶剂法、熔融法制备固体分散体,结合偏振光显微镜(PLM)、红外光谱(FTIR)、X-射线衍射法(XRD)对制备物进行物相鉴定,得出黄酮在物理混合物中以晶体形式存在,在固体分散体中以无定型形式存在,为改善药物的溶出提供了依据,并对固体分散体的吸湿性、高温性与溶出等性质进行考察,为进一步的制剂工作提供依据。
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