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过表达Gab1蛋白对缺血再灌注损伤脐静脉内皮细胞保护作用机制的研究

摘要目的:Gab1是一种接头蛋白,在缺血再灌注损伤中降低心脏受损伤程度至关重要。本研究旨在探讨过表达的Gab1蛋白对缺血再灌注损伤中脐静脉内皮细胞的影响及其分子机制。<br>  方法:将脐静脉内皮细胞分为对照组,缺氧/复氧组和缺氧/复氧+Gab1组。细胞铺板2小时后,换无糖培养液。缺氧/复氧组、缺氧/复氧+Gab1组置于三气培养箱(5%CO2、94%N2、1%O2)缺氧培养6小时,之后换完全培养基置于正常培养箱复氧16小时。缺氧/复氧+Gab1组缺氧前用包含Gab1基因的腺病毒进行转染,提高细胞内Gab1的表达以便进行后续实验,对照组在37℃,5%CO2培养箱中培养24小时。使用MTT法,TUNEL法分别检测细胞在对照组,缺氧/复氧组和缺氧/复氧+Gab1组的增殖能力和凋亡率,观察Gab1对脐静脉内皮细胞内活性氧簇(ROS)、乳酸脱氢酶(LDH)的影响。采用WesternBlot法检测Gab1、SHP2及ERK1/2等相关蛋白的表达水平。<br>  结果:与正常对照组相比,缺氧/复氧组细胞增殖能力明显降低(plt;0.05),凋亡率明显增加(plt;0.05),细胞内ROS,LDH显著高于正常对照组(plt;0.05)。缺氧/复氧+Gab1组,细胞增殖能力明显高于缺氧/复氧组(plt;0.05),凋亡率明显低于缺氧/复氧组(plt;0.05),细胞内ROS,LDH显著低于缺氧/复氧组(plt;0.05)。缺氧/复氧+Gab1组Gab1、SHP2及ERK1/2的磷酸化水平明显高于缺氧/复氧组。<br>  结论:过表达的Gab1对缺氧再复氧损伤中脐静脉内皮细胞具有保护作用,过表达的Gab1通过ERK1/2通路降低细胞内ROS和LDH水平,发挥缺氧复氧损伤中脐静脉内皮的保护作用。

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