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摘要严重急性呼吸道综合征冠状病毒2型（Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2， SARS-CoV-2）感染引起发病率高、传染性强的急性呼吸道疾病，即新型冠状病毒肺炎（Coronavirus disease 2019，COVID-19）。SARS-CoV-2基因组为单股正链RNA，可编码29个病毒蛋白。Nsp1蛋白是SARS-CoV-2病毒编码的第一个非结构蛋白，是影响病毒毒力的决定因子。前期研究发现，SARS-CoV-2 Nsp1蛋白能够抑制炎症因子（IL-6和IL-8）的产生，但是机制尚不清楚。<br>　　为后续有利地研究SARS-CoV-2 Nsp1蛋白的功能，本研究首先通过无缝克隆技术构建了真核重组载体 pCMV-Myc-Nsp1 和 pEGFP-N1-Nsp1 ，利用 Western blot 技术检验SARS-CoV-2 Nsp1 重组质粒在细胞中成功表达。随后，通过购买原核表达质粒pET-28a-SARS-CoV-2-Nsp1，经IPTG诱导原核重组质粒表达纯化蛋白，经考马斯亮蓝染色、Western blot和亲和层析纯化得到SARS-CoV-2 Nsp1蛋白。<br>　　NF-κB信号通路被激活的情况下，可以介导下游炎性因子的释放。为探究SARS-CoV-2 Nsp1蛋白对炎性因子产生的影响，本研究将pCMV-Myc-Nsp1和pEGFP-N1-Nsp1分别转染至细胞，在TNF-α、LPS刺激下或在过表达MyD88、p65条件下，利用RT-PCR技术检测炎性因子IL-6、IL-8和TNF-αmRNA的转录情况。结果发现，SARS-CoV-2 Nsp1蛋白能够抑制由TNF-α、LPS、MyD88和p65所介导的炎性因子IL-6、IL-8和TNF-αmRNA转录。这些结果说明，SARS-CoV-2 Nsp1蛋白能够抑制炎性因子的产生。<br>　　p65、p50和IκBα蛋白在NF-κB信号通路发挥关键作用。为进一步探究SARS-CoV-2 Nsp1蛋白对p65、p50和IκBα蛋白是否具有影响。本研究将重组质粒转染细胞后，利用Western blot和RT-PCR等技术检测p65、p50和IκBα的蛋白表达和mRNA转录水平。结果发现，SARS-CoV-2 Nsp1蛋白能够抑制p65 mRNA转录水平。这些结果说明，SARS-CoV-2 Nsp1蛋白通过抑制p65 mRNA转录抑制炎性因子的产生。<br>　　mRNA修饰数据库中显示，p65 mRNA存在m6A修饰。为探究SARS-CoV-2 Nsp1蛋白抑制p65 mRNA转录是否与m6A修饰所介导mRNA降解有关，本研究将pEGFP-N1-Nsp1质粒转染至细胞中，利用Western blot检测m6A阅读蛋白YTHDF2蛋白的表达情况。结果发现， SARS-CoV-2 Nsp1蛋白上调YTHDF2的表达，并且本研究进一步发现，过表达YTHDF2蛋白能够抑制p65 mRNA转录。这些结果说明，SARS-CoV-2 Nsp1蛋白能够通过上调YTHDF2蛋白抑制p65 mRNA转录，从而降低p65的蛋白表达。<br>　　为探究SARS-CoV-2 Nsp1蛋白抑制NF-κB信号通路激活的关键结构域，本研究构建了三个SARS-CoV-2 Nsp1基因截短体（即pEGFP-N1-S1、pEGFP-N1-S2和pEGFP-N1-S3），并转染至细胞，利用Western blot和RT-PCR技术检测p65、p50、IκBα和YTHDF2蛋白表达及IL-6、IL-8、TNF-α和p65 mRNA转录。结果发现，pEGFP-N1-S3能够抑制IL-6、IL-8、TNF-α和p65 mRNA转录及上调YTHDF2蛋白表达。这些结果说明，SARS-CoV-2 Nsp1蛋白126-180氨基酸区段是Nsp1蛋白抑制NF-κB信号通路激活的关键结构域。<br>　　综上所述，本研究发现SARS-CoV-2 Nsp1蛋白的126-180氨基酸区段可以通过上调YTHDF2蛋白表达促进p65 mRNA的降解，从而抑制炎症因子的产生，阻断NF-κB信号通路的激活。本研究初步解析了SARS-CoV-2 Nsp1蛋白的新功能，为了解SARS-CoV-2病毒致病性及治疗COVID-19疾病提供新思路。