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摘要急性髓系白血病（Acutemyeloidleukemia，AML）是一种恶性血液系统疾病，其特征是骨髓（Bonemarrow，BM）和外周血（Peripheralblood，PB）中未成熟髓系细胞的异常积累与扩增，最终导致正常造血功能衰竭。尽管在过去的几十年里，针对AML的免疫治疗取得了相当大的进展，但仅有少数患者能够从中获益，且复发率很高。白血病细胞（Leukemicblasts,LBs）免疫原性降低是阻碍免疫治疗疗效的主要原因，表观遗传调控异常是LBs免疫原性降低的内在机制。DNA上5’位置胞嘧啶甲基化（简称DNA甲基化）在调节AML的发生与发展过程中起重要作用。在AML中，CpG序列重复率高的区域（CpGisland，CpG岛）处于DNA高甲基化状态，它会抑制干扰素基因刺激因子（STING）的活性，从而降低主要组织相容性复合体（Majorhistocompatibilitycomplex，MHC）的表达，进而减少LBs的抗原呈递，最终降低LBs的免疫原性。另一方面，RNA上N6-甲基腺苷修饰（简称m6A-RNA甲基化）通过剪切、输出、翻译和加工调节转录和蛋白质表达，当机体中的m6A去甲基化酶（FTO、ALKBH5）过度表达时，会降低LBs中抑癌基因的稳定性并上调程序性细胞死亡配体1（PD-L1）的表达。PD-L1通过与CD8+T细胞上的程序性死亡受体1（PD-1）结合来降低CD8+T细胞对LBs的识别与杀伤能力。DNA甲基化抑制剂（DNAmethyltransferaseinhibitor，DNMTi）和m6A去甲基化抑制剂作为表观遗传药物在激活机体免疫应答方面发挥了重要作用。然而，这些单一表观遗传药物的治疗效果并不明显，且现有的表观遗传药物存在靶向能力弱、毒副作用大、耐药等问题。开发新的联合治疗策略并实现药物的定点、可控释放是迫切需要解决的问题。<br>　　金属-有机框架（Metal-organicframework，MOF）具有孔隙度高、稳定性好、生物相容性好等优点，在生物医学领域展现出了广阔的应用前景。为此，我们构建了基于Mn/FeMOF的双金属仿生纳米系统（命名为AFMMB），该系统由DNA甲基化抑制剂（Azacytidine，AZA）、白血病干细胞（Leukemiastemcell，LSC）膜和促自噬肽（Beclin-1）组成。由于LSC膜的“归巢”效应和免疫相容性，AFMMB能够同时靶向LBs与LSCs。AFMMB表面的Beclin-1肽可与高尔基体相关蛋白（Golgiassociatedplantpathogenesis-relatedprotein1，GAPR-1）结合并诱导自噬，从而使AFMMB降解并释放出锰离子、铁离子和AZA。本文的主要研究内容如下：<br>　　（1）设计并合成AFMMB仿生纳米系统，并对其形貌、结构、稳定性、载药量和包封率、释放机制等进行研究。<br>　　（2）通过电感耦合等离子体原子发射光谱（ICP-MS）、共聚焦激光扫描显微镜（CLSM）、小动物活体光学成像系统（IVIS）检测AFMMB仿生纳米系统的体内外靶向能力。<br>　　（3）通过蛋白免疫印迹分析（Westernblotting）、m6A斑点印迹分析、酶联免疫吸附测定（ELISA）、定量RT-PCR等检测方法研究AFMMB在C1498细胞内的分子作用机制。通过BODIPY染色、流式细胞术分析AFMMB抑制C1498细胞的效果。<br>　　（4）通过构建C1498小鼠AML模型，研究AFMMB对AML的体内抑制效果、生物分布、免疫激活效果、生物安全性。同时，构建4T1小鼠乳腺癌模型，研究AFMMB对实体瘤的治疗效果。<br>　　结果显示，我们成功合成了孔隙度高、稳定性好、靶向能力强的AFMMB仿生纳米系统。在机制上，AZA和锰离子能够抑制DNA甲基化，重新激活STING通路并上调MHC-I，铁离子可以增强m6ARNA甲基化修饰，从而降低PD-L1转录稳定性。这种双重表观遗传调控增加了AML细胞的免疫原性，从而增强了CD8+T细胞介导的免疫应答。最后，我们发现AFMMB对实体瘤也具有良好的抑制效果，具有广泛治疗癌症的作用，为进一步的临床验证提供研究基础和理论依据。