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摘要目的：<br>　　PiggyBac(PB)转座子是来源于粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)的TTAA型转座子。它作为一种插入型的突变工具，应用于多种真核生物细胞中。常用突变工具包括紫外诱变和化学诱变及转座等，PB转座子插入型突变利用转座子上的通用序列，通过PCR技术对可能存在转座子插入的位点快速进行检测，发现突变位点。目前，PiggyBac (PB)转座子系统已被用于哺乳动物，植物，昆虫和S. pombe等物种中进行突变。而在S. pombe中使用PB转座子系统对核糖体合成相关方面没有进行相关研究。本研究在S. pombe中构建了一个基于PB转座子的筛选系统，第一次将PB转座子应用于核糖体合成相关因子中，通过插入突变实现基因筛选。利用本研究所构建的系统，可快速高效地在S. pombe中对核糖体合成相关目的基因进行筛选，进一步研究它们在核糖体合成过程中的功能。<br>　　方法：<br>　　本研究主要采用PB转座子的筛选系统对核糖体合成相关的因子如Nog2、Tif6、Cid4、Pol5、Rrp14等因子展开研究。首先，构建筛选系统。构建目的基因相应的拯救质粒以及敲除合成片段，后采用同源重组技术，依次将拯救质粒及目的基因敲除片段转入野生型菌株，从而获得既包含拯救质粒也含有目的基因敲除的菌株，整合PB转座酶，完成筛选系统的构建。转座酶PBase受硫胺抑制的 nmt1启动子控制。当在无硫胺培养基上生长的细胞诱导PBase表达时，PB [ura4 +]从arg6供体位点被切除，将细胞转化为精氨酸原养体 (Arg+) 。PB [ura4 +]的切除和复位可以同时进行，通过在缺乏精氨酸和尿嘧啶的培养基上培养细胞来选择。通过转座现象，来探究核糖体相关因子的基因的重要程度及其功能，对于核糖体的生物合成过程的研究也有一定的推动作用。<br>　　结果：<br>　　利用已知的pst1基因，它的敲除致死现象可以通过pst2基因的敲除而被抑制，使pst1敲除的菌株存活，通过PB转座子系统，验证PB转座子系统是可以正常工作的，且pst2基因为pst1基因的候选抑制子。nog2、tif6、pol5基因为致死基因，敲除后会导致致死现象，rrp14、cid14基因为致病基因。经过对核糖体相关因子Nog2、Pol5等进行PB转座子筛选和大量的重复实验，本研究发现Nog2、Tif6、Pol5、Rrp14等因子可能并不存在候选抑制子，说明这些因子在核糖体的合成过程中发挥着非常重要的作用，不能够被替代。<br>　　结论：<br>　　1、成功构建PiggyBac (PB)转座子对候选目的基因的诱变筛选系统。<br>　　2、本研究发现核糖体相关因子Nog2、Tif6、Pol5、Rrp14、Cid14可能并不存在候选抑制子，提示它们高度保守且在核糖体合成过程中发挥重要作用，不能够被替代。