摘要研究目的:<br> 多发性硬化(multiplesclerosis,MS)是免疫介导的中枢神经系统(centralnervoussystem,CNS)脱髓鞘疾病,实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimentalautoimmuneencephalomyelitis,EAE)是MS的经典动物模型,通过髓鞘蛋白脂蛋白、髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(myelinoligodendrocyteglycoprotein,MOG)或髓鞘碱性蛋白免疫实验动物而诱导。治疗MS的最终目标是抑制炎症反应和诱导髓鞘再生,目前治疗MS的药物主要以调节免疫为主,对疾病的治疗并不完全有效,长期使用时还可能出现严重的不良反应。<br> 肝源性干细胞(liverstemcells,LSCs)是肝脏内干细胞的总称,LSCs不仅能分化为肝细胞和胆管细胞以促进受损肝组织的恢复,还能通过免疫调节缓解免疫介导的肝损伤。<br> 基于LSCs的免疫调节能力,本研究拟探索人肝源性干细胞(humanliverstemcells,H-LSCs)和鼠肝源性干细胞(mouseliverstemcells,M-LSCs)对EAE的治疗作用,并比较LSCs的同种异体移植与异种移植对EAE的短期疗效差异。<br> 研究方法:<br> (1)MOG35-55肽段和含灭活结核分支杆菌H37Ra的完全弗氏佐剂混合形成乳化剂,皮下注射于C57BL/6雌性小鼠背部,随后腹腔注射百日咳毒素(pertussistoxin,PTX),48小时后再次腹腔注射PTX从而建立小鼠EAE模型,于免疫诱导第0天开始每日测定小鼠体重及行为学评分;<br> (2)小鼠随机分为3组,分别为EAE组、H-LSCs组、M-LSCs组,构建EAE模型后,开始发病时(免疫诱导第10天),上述组别小鼠分别腹腔注射等体积的PBS、H-LSCs细胞悬液或M-LSCs细胞悬液,于免疫诱导第14天再次给予上述治疗;<br> (3)于EAE发病高峰期(免疫诱导第20天)取小鼠脊髓,苏木精-伊染色及固蓝髓鞘染色评估脊髓炎症细胞浸润情况及脱髓鞘情况;<br> (4)于EAE发病高峰期(免疫诱导第20天)取小鼠外周血与脾脏,流式细胞术检测外周血及脾脏CD4+T细胞比例、CD8+T细胞比例,检测脾脏调节性T细胞(regulatoryTcells,Tregs)、髓源性抑制细胞(myeloid-derivedsuppressorcells,MDSCs)及其亚型单核细胞样MDSCs(mononuclearphagocytes-likeMDSCs,M-MDSCs)与粒细胞样MDSCs(granulocyte-likeMDSCs,G-MDSCs)比例;<br> (5)于EAE发病高峰期(免疫诱导第20天)取小鼠脾脏,定量实时聚合酶链式反应检测脾脏中免疫调节因子精氨酸酶-1(Arginase-1,Arg-1)基因相对表达水平。<br> 研究结果:<br> (1)H-LSCs组和M-LSCs组小鼠体重均大于EAE组,行为学评分均低于EAE组,H-LSCs组与M-LSCs组在体重和行为学评分方面无差异;<br> (2)与EAE组相比,H-LSCs组和M-LSCs组脊髓炎细胞浸润及脱髓鞘程度与范围均减少,H-LSCs组和M-LSCs组在炎细胞浸润与脱髓鞘方面无差异;<br> (3)与EAE组相比,H-LSCs组和M-LSCs组外周血和脾脏中CD4+T细胞比例下降,CD8+T细胞比例无差异,M-LSCs组脾脏中Tregs比例较EAE组增加,H-LSCs组与EAE组Tregs比例无差异,外周血和脾脏中的CD4+T细胞、CD8+T细胞、脾脏Tregs在H-LSCs组与M-LSCs组中无差异;<br> (4)与EAE组相比,H-LSCs组和M-LSCs组脾脏中MDSCs的比例上调,M-LSCs组脾脏MDSCs较H-LSCs组增加,MDSCs亚型分析显示,EAE组、H-LSCs组与M-LSCs组之间的G-MDSCs、M-MDSCs均无差异,但各组脾脏中G-MDSCs比例均显著高于M-MDSCs比例;<br> (5)与EAE组相比,M-LSCs组脾脏中Arg-1基因表达水平显著上调,而H-LSCs组与EAE组、H-LSCs组与M-LSCs组之间均无显著差异。<br> 研究结论:<br> (1)H-LSCs(异种移植)与M-LSCs(同种异体移植)对EAE有相似的治疗效果,都可改善EAE小鼠的神经功能障碍,降低脊髓炎症浸润和脱髓鞘程度;<br> (2)在EAE中,H-LSCs与M-LSCs可以下调CD4+T细胞、诱导MDSCs扩增;<br> (3)在EAE中,M-LSCs还可以上调Tregs。
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