检索历史 清除

摘要研究目的：<br>　　多发性硬化（multiplesclerosis，MS）是免疫介导的中枢神经系统（centralnervoussystem，CNS）脱髓鞘疾病，实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimentalautoimmuneencephalomyelitis，EAE）是MS的经典动物模型，通过髓鞘蛋白脂蛋白、髓鞘少突胶质细胞糖蛋白（myelinoligodendrocyteglycoprotein，MOG）或髓鞘碱性蛋白免疫实验动物而诱导。治疗MS的最终目标是抑制炎症反应和诱导髓鞘再生，目前治疗MS的药物主要以调节免疫为主，对疾病的治疗并不完全有效，长期使用时还可能出现严重的不良反应。<br>　　肝源性干细胞（liverstemcells，LSCs）是肝脏内干细胞的总称，LSCs不仅能分化为肝细胞和胆管细胞以促进受损肝组织的恢复，还能通过免疫调节缓解免疫介导的肝损伤。<br>　　基于LSCs的免疫调节能力，本研究拟探索人肝源性干细胞（humanliverstemcells，H-LSCs）和鼠肝源性干细胞（mouseliverstemcells，M-LSCs）对EAE的治疗作用，并比较LSCs的同种异体移植与异种移植对EAE的短期疗效差异。<br>　　研究方法：<br>　　（1）MOG35-55肽段和含灭活结核分支杆菌H37Ra的完全弗氏佐剂混合形成乳化剂，皮下注射于C57BL/6雌性小鼠背部，随后腹腔注射百日咳毒素（pertussistoxin，PTX），48小时后再次腹腔注射PTX从而建立小鼠EAE模型，于免疫诱导第0天开始每日测定小鼠体重及行为学评分；<br>　　（2）小鼠随机分为3组，分别为EAE组、H-LSCs组、M-LSCs组，构建EAE模型后，开始发病时（免疫诱导第10天），上述组别小鼠分别腹腔注射等体积的PBS、H-LSCs细胞悬液或M-LSCs细胞悬液，于免疫诱导第14天再次给予上述治疗；<br>　　（3）于EAE发病高峰期（免疫诱导第20天）取小鼠脊髓，苏木精-伊染色及固蓝髓鞘染色评估脊髓炎症细胞浸润情况及脱髓鞘情况；<br>　　（4）于EAE发病高峰期（免疫诱导第20天）取小鼠外周血与脾脏，流式细胞术检测外周血及脾脏CD4+T细胞比例、CD8+T细胞比例，检测脾脏调节性T细胞（regulatoryTcells，Tregs)、髓源性抑制细胞（myeloid-derivedsuppressorcells，MDSCs）及其亚型单核细胞样MDSCs（mononuclearphagocytes-likeMDSCs，M-MDSCs）与粒细胞样MDSCs（granulocyte-likeMDSCs，G-MDSCs）比例；<br>　　（5）于EAE发病高峰期（免疫诱导第20天）取小鼠脾脏，定量实时聚合酶链式反应检测脾脏中免疫调节因子精氨酸酶-1（Arginase-1，Arg-1）基因相对表达水平。<br>　　研究结果：<br>　　（1）H-LSCs组和M-LSCs组小鼠体重均大于EAE组，行为学评分均低于EAE组，H-LSCs组与M-LSCs组在体重和行为学评分方面无差异；<br>　　（2）与EAE组相比，H-LSCs组和M-LSCs组脊髓炎细胞浸润及脱髓鞘程度与范围均减少，H-LSCs组和M-LSCs组在炎细胞浸润与脱髓鞘方面无差异；<br>　　（3）与EAE组相比，H-LSCs组和M-LSCs组外周血和脾脏中CD4+T细胞比例下降，CD8+T细胞比例无差异，M-LSCs组脾脏中Tregs比例较EAE组增加，H-LSCs组与EAE组Tregs比例无差异，外周血和脾脏中的CD4+T细胞、CD8+T细胞、脾脏Tregs在H-LSCs组与M-LSCs组中无差异；<br>　　（4）与EAE组相比，H-LSCs组和M-LSCs组脾脏中MDSCs的比例上调，M-LSCs组脾脏MDSCs较H-LSCs组增加，MDSCs亚型分析显示，EAE组、H-LSCs组与M-LSCs组之间的G-MDSCs、M-MDSCs均无差异，但各组脾脏中G-MDSCs比例均显著高于M-MDSCs比例；<br>　　（5）与EAE组相比，M-LSCs组脾脏中Arg-1基因表达水平显著上调，而H-LSCs组与EAE组、H-LSCs组与M-LSCs组之间均无显著差异。<br>　　研究结论：<br>　　（1）H-LSCs（异种移植）与M-LSCs（同种异体移植）对EAE有相似的治疗效果，都可改善EAE小鼠的神经功能障碍，降低脊髓炎症浸润和脱髓鞘程度；<br>　　（2）在EAE中，H-LSCs与M-LSCs可以下调CD4+T细胞、诱导MDSCs扩增；<br>　　（3）在EAE中，M-LSCs还可以上调Tregs。