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摘要间质性肺病（ILD）是一组以肺间质炎症和纤维化为特征的限制性肺疾病，患者最终因呼吸衰竭而死亡。其中特发性肺纤维化（IPF）和多种危害因素暴露相关的 ILD 的发病率呈逐年升高态势。但现有的小分子治疗药物仅能缓解疾病进展，无法有效逆转肺纤维化，且副作用明显，成本高昂，导致该类疾病患者5年生存率很低，预后极差，因此研发新型安全有效的抗肺纤维化药物具有重要意义。<br>　　本课题组前期对抗氧化肽 DR8 进行构效关系研究后设计改造出了血清稳定性明显提升的新型低毒多肽 DR3penA，并证实该多肽在模拟 IPF 的经典模型——博来霉素小鼠肺纤维化模型中具有良好的抗肺纤维化活性，具备进一步研发的潜力。由于单一的动物模型预测人体疗效往往具有局限性，运用多种模型进行研究可从多角度评价药效，进而推动先导化合物的成药。因此，基于研发针对矽肺和百草枯肺有效药物的紧迫性以及多模型评价DR3penA临床前药效的必要性，本课题在SiO2和PQ诱导的肺纤维化模型中进一步研究了多肽DR3penA的抗肺纤维化效果。<br>　　实验结果显示，在SiO2诱导的A549细胞模型和TGF-β1诱导的BEAS-2B细胞模型中，DR3penA可明显抑制纤维化标志物α-SMA、Fibronectin和Collagen I的异常高表达。在SiO2诱导的矽肺小鼠模型和PQ诱导的大鼠肺纤维化模型中，运用Hamp;E和Masson染色、免疫组化、Western blot以及RT-qPCR等多种手段评价了DR3penA的体内抗肺纤维化活性。结果表明DR3penA（0.5、1.6和5.0 mg/kg）可降低矽肺小鼠肺部纤维化标志物Fibronectin和Collagen I的异常高表达，减轻肺纤维化程度，在小鼠体内的抗肺纤维化效果与阳性对照药物吡非尼酮（PFD） （100 mg/kg）相比无明显差异；在大鼠肺纤维化模型中，DR3penA（0.200、0.632和2.000 mg/kg）可减少PQ引起的细胞外基质（ECM）的过度沉积，降低肺间质实变程度，且对Fibronectin和Collagen I的抑制效果与阳性对照药物PFD（100 mg/kg）相比无显著差异。<br>　　由于SiO2和PQ均可诱导机体产生氧化应激并引发上皮间充质转化（EMT）amp;nbsp;过程从而导致肺纤维化进展，因此本课题在体内外实验中均检测了氧化应激标志物烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4（NOX4）和EMT标志物（E-Cadherin与N-Cadherin）的表达情况，同时检测了细胞中活性氧（ROS）的生成以及动物血清中过氧化氢酶（CAT）活力、抗氧化物谷胱甘肽（GSH）和脂质过氧化产物丙二醛（MDA）的含量。结果提示DR3penA可显著抑制SiO2和PQ诱导的氧化应激和EMT过程。<br>　　初步机制研究发现，在矽肺纤维化中，DR3penA能够通过抑制氧化应激，减少ROS的产生进而负调控PI3K/AKT信号通路的激活，从而阻碍EMT过程，减少ECM的过度积累，最终实现抗肺纤维化；在PQ所致的肺纤维化中，DR3penA能够通过抑制氧化应激和 TGF-β 的异常高表达来降低 ERK 和 p38 的磷酸化水平，从而阻碍EMT过程，发挥抗肺纤维化作用。<br>　　综上，本研究的结果表明DR3penA可有效抑制SiO2和PQ诱导的肺纤维化进展，根据不同给药途径下药物生物利用度的转换，DR3penA 的体内抗肺纤维化活性与对照药物PFD相当，并且具有低剂量优势。相关机制研究表明DR3penA可通过抑制PI3K/AKT和MAPK通路的激活来发挥抗肺纤维化作用。因此，多肽 DR3penA 可作为治疗纤维化性 ILDs 的候选化合物进行深入的成药性评价，本研究为开发具有自主知识产权的用于治疗纤维化相关疾病的多肽药物提供了研究基础。