检索历史 清除

摘要目的：检测骨膜蛋白（Periostin，POSTN）在正常和退变的椎间盘髓核组织（Nucleus Pulposus，NP）的表达情况，并进一步研究 POSTN 与大鼠髓核细胞（Nucleus pulposus cells，NPCs）炎症和凋亡的关系。<br>　　方法：基于椎间盘退变（Intervertebral Disc Degeneration，IVDD）的Pffirmann分级，收集不同退变分级的NP组织样本。Hamp;E染色进一步确认NP样本的退变情况，并通过 Western Blot 和免疫组织化学检测不同退变等级的 NP 组织中POSTN，p-P65，iNOS 和 C-caspase3 的表达情况。随后利用针刺造模法建立大鼠 IVDD 模型，通过 Western Blot 和免疫组织化学检测正常和退变大鼠 NP 中POSTN，p-P65，iNOS和C-caspase3的表达情况。此外，我们建立IL-1β诱导的NP细胞退变模型，使用慢病毒携带的小干扰RNA（si-RNA）抑制POSTN的表达，并使用CU-T12-9激活NF-κB信号通路。通过Western Blot和免疫荧光等方法检测NPCs炎症反应和凋亡水平的相关蛋白表达情况以及NF-κB信号通路中相关蛋白指标的表达变化。<br>　　结果：通过免疫组织化学检测发现，相较于人和大鼠正常的NP组织，退变的NP组织中POSTN的阳性细胞率更高。并且Western Blot也证实在退变的NP组织中POSTN蛋白的表达明显增高。在体外IL-1β诱导的NPCs退变模型中，通过免疫荧光检测和Western Blot发现，在退变的大鼠NPCs中POSTN的表达显著上升。当用慢病毒携带的si-POSTN转染抑制细胞中POSTN的表达后，通过Western Blot发现，原本受IL-1β诱导的NPCs中的表达升高的炎症因子iNOS、COX-2、IL-6 和促凋亡相关蛋白 C-caspase3、BAX 的表达降低，而原本表达降低的抗凋亡相关蛋白Bcl-2表达升高，免疫荧光检测iNOS的荧光强度和TUNEL染色检测凋亡阳性细胞率也得到相应的结果。并且抑制POSTN的表达还抑制了P65的核易位，起到了抑制NF-κB信号通路活性的作用。而当使用NF-κB信号通路激活剂CU-T12-9处理NPCs后，又逆转了si-POSTN对IL-1β诱导的NPCs的炎症和凋亡的保护作用。<br>　　结论：POSTN在IVDD中表达增高，并且抑制POSTN表达可通过降低NF-κBamp;nbsp;信号通路的活性缓解退变NPCs的炎症反应和凋亡水平。