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摘要非酒精性脂肪性肝炎（NASH）是单纯性脂肪肝向肝纤维化、肝硬化、原发性肝癌和肝衰竭等终末期肝病转化的重要环节。NASH的发病率和死亡率在世界范围内上升，目前临床针对NASH的药物治疗多采用调节代谢、抑制炎症反应、降低细胞损伤和稳定细胞膜类药物，疗程长，副作用大，疗效不甚理想。黄芩（Scutellaria baicalensisGeorgi）是常用中药，其主要有效成分黄芩苷具有抗炎、抗氧化、降脂和保肝等作用，临床上黄芩苷片/胶囊用于急、慢性和迁延性肝炎的辅助治疗。但黄芩苷溶解度差，生物利用度低，针对这一问题，课题组前期从黄芩水提取物中分离得到一种水溶性较好的黄芩苷（即黄芩苷镁），研究表明，黄芩苷镁是黄芩苷在药材中的原本存在形式，相关研究已获得中国、美国及欧盟发明专利授权。进一步的药理学研究表明，黄芩苷镁可通过调节炎症和氧化应激反应对四氯化碳（CCl4）和脂多糖（LPS）联合d-氨基半乳糖诱导的急性肝损伤（ALI）发挥治疗作用，但黄芩苷镁能否治疗NASH尚不明确。<br>　　目的：<br>　　本实验选用高脂饮食诱导建立大鼠NASH模型，比较不同因素对黄芩苷镁治疗NASH大鼠疗效的影响；探究黄芩苷镁对NASH大鼠的治疗作用，并基于核苷酸结合寡聚化结构域样蛋白受体3（NLRP3）/含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶（Caspase）-1/白细胞介素（IL）-1β信号通路，初步探讨黄芩苷镁治疗NASH的作用机制，为NASH的新药研发提供理论基础和实验依据。<br>　　方法：<br>　　1.采用高脂饮食诱导建立NASH大鼠模型，SD大鼠随机分为空白组（control）、模型组（model）和黄芩苷镁（25，50，100和150 mg/kg）组共6组，采用尾静脉注射的方式给药，考察造模时间、给药时间和剂量对大鼠的肝指数、血清生化指标及病理结果的影响。<br>　　2.采用高脂饮食诱导造模，48只SD大鼠随机分为空白组、模型组、黄芩苷镁低剂量组（50 mg/kg）、黄芩苷镁高剂量组（150 mg/kg）、黄芩苷组（146.4 mg/kg）和硫酸镁组（MgSO4，19.7 mg/kg）共6组，黄芩苷组剂量与黄芩苷镁高剂量组中的黄芩苷母核等摩尔数，MgSO4组与黄芩苷镁高剂量组中的镁离子等摩尔给药。空白组饲喂普通饲料，其余各组高脂饮食8周，第9周开始大鼠尾静脉注射给药2周，观察大鼠一般状态，第10周给药结束后处死大鼠，收集血清和肝组织等用于后续研究。<br>　　3.测量各组大鼠体重及肝湿重，计算肝指数；肝组织进行苏木精-伊红（HE）和油红 O 染色，观察病理变化，进行非酒精性脂肪性肝病活动度积分（NAS）；测定血清中的谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL-C）和低密度脂蛋白（LDL-C）含量，以及超氧化物歧化酶（SOD）和髓过氧化物酶（MPO）的活性和丙二醛（MDA）含量；及肝组织中的IL-6、IL-10和IL-1β含量。<br>　　4.应用蛋白质免疫印迹（western blot）和实时荧光定量聚合酶链式反应（real-time PCR）检测肝组织中肿瘤坏死因子（TNF）-α、NLRP3、IL-18、IL-1β和Caspase-1的蛋白和基因表达水平。<br>　　结果：<br>　　1.与造模6周相比，造模8周时，模型组大鼠肝指数明显升高，HE染色可见肝细胞核界限不清，肝索排列紊乱，产生空泡及气球样变，NAS显著增加，AST、ALT、TG、TC和LDL-C显著增加，HDL-C明显降低（P＜0.01）。给药1周后各给药组大部分指标均无明显变化（P＞0.05）；给药2周时，与模型组相比，25 mg/kg组各指标均无明显变化，50 mg/kg组TC、TG、ALT和AST显著降低（P＜0.05），100 mg/kg组大鼠肝指数、ALT、AST、TC、TG和LDL-C明显降低（P＜0.01），HDL-C升高（P＜0.05），150 mg/kg组大鼠能显著改善生化指标和病理情况，降低NAS（P＜0.01）。<br>　　2.观察大鼠一般情况，发现模型组大鼠体型肥硕且毛发枯黄，病理结果显示，大鼠细胞核边界模糊，肝细胞结构变形，肝小叶界限模糊，肝索排列紊乱，肝内出现空泡及气球样变，周围炎性细胞浸润，NAS明显增加（P＜0.01），肝组织中存在大量红色脂滴，颜色较深，融合成片；给药组较模型组大鼠肝组织细胞核结构清晰完整，肝小叶排列整齐，NAS降低，脂滴减少，其中黄芩苷镁高剂量组改善效果最为显著（P＜0.01）。<br>　　3.通过测定血清生化指标，我们发现黄芩苷镁可改善NASH大鼠的肝损伤、脂质沉积和氧化应激反应。与空白组相比，模型组大鼠 ALT、AST、LDL-C、TC和TG升高，而HDL-C明显降低（P＜0.01）；与模型组相比，黄芩苷镁能显著降低AST、ALT、LDL-C、TC和TG含量，提高HDL-C含量（P＜0.05）。另外，与对照组相比，模型组大鼠SOD活性降低，MDA含量和MPO活性增高（P＜0.01）；与模型组相比，给药组能提高SOD活性，降低MDA含量和MPO活性，其中黄芩苷镁高剂量组的作用最显著（P＜0.01）。<br>　　4.通过检测肝组织中的炎症因子，发现黄芩苷镁可改善NASH大鼠的炎症反应。与模型组相比，药物干预可显著降低促炎因子IL-6和IL-1β水平，提高抗炎因子IL-10水平；同时降低NLRP3、TNF-α、Caspase-1、IL-18和IL-1β的基因和蛋白表达，其中黄芩苷镁高剂量组的改善效果最明显（P＜0.01）。<br>　　结论：<br>　　1.造模8周比6周更接近于NASH模型，给药2周对NASH大鼠模型的治疗作用更明显；以50 mg/kg和150 mg/kg作为给药剂量，进一步探讨黄芩苷镁对NASH大鼠的治疗作用及机制。<br>　　2.黄芩苷镁通过改善脂质沉积、氧化应激和炎症反应对HFD诱导NASH大鼠模型发挥治疗作用，且作用明显优于黄芩苷，其作用机制可能与抑制NLRP3/Caspase-1/IL-1β炎症信号通路的激活有关。