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摘要关节的透明软骨是由少量软骨细胞、前体软骨细胞以及细胞外基质构成的一种无血管、无神经和淋巴管的组织。当其受到损伤后由于营养供给不足、软骨细胞增殖速度较慢等因素导致软骨损伤难以自愈。严重的关节软骨损伤可能引发剥脱性骨软骨炎、复发性多软骨炎、骨关节炎等疾病。根据2017年的全球疾病负担（globalburdenofdisease，GBD）报告显示，从2007年到2017年期间，骨关节炎患病人数增长了31.4%。目前的治疗方法有软骨成形术、自体软骨细胞植入等，但都是姑息缓解性的，不能从根本上治愈软骨缺损。因此，迫切需要更有效的治疗策略。<br>　　间充质干细胞（mesenchymalstemcell,MSC）衍生的细胞外囊泡（Extracellularvesicle,EV）含有多种细胞来源的活性蛋白和核酸分子，是介导MSC旁分泌调节功能的主要成分，越来越多的研究表明它可以成为一种替代MSC细胞的无细胞治疗试剂，已在包括骨和软骨修复在内的再生医学领域展现出巨大的潜力。淫羊藿苷（icariin,ICA）是中药淫羊藿的一种天然提取物，具有抗炎和促进软骨细胞存活的活性，潜在地可以用于促进软骨再生。然而，还从来没有人研究过MSC-EV与ICA联合使用是否可以产生协同效应，显著促进EV或ICA单独使用对软骨缺损的修复作用。<br>　　目的：本研究旨在探讨三维培养干细胞来源的细胞外囊泡（threedimension-extracellularvesicle，3D-EVs）与ICA联合治疗是否可以增强其对软骨缺损的修复能力，并且通过研究两者联用对软骨修复相关因子的调节作用，阐明3D-EVs与ICA修复软骨缺损的分子机制。<br>　　方法：1、将大鼠骨髓来源的MSC接种于海藻酸钠（sodiumalginate，SA）和透明质酸（hyaluronicacid，HA）构成的水凝胶基质材料中进行三维（threedimension,3D）细胞培养，用以制备MSC衍生的高活性3D-EV；2、分别测试EV和ICA对MSCs和IL-1β诱导的炎性软骨细胞的增殖和3D迁移的影响；3、在IL-1β诱导的炎性软骨细胞模型中，通过定量PCR（RT-PCR）和免疫印迹(westernblotting,WB）检测,考察3D-EV和ICA单独或联合使用时，对软骨细胞生长、迁移及与软骨基质合成或分解有关关键基因表达的影响；4、将3D-EVs和ICA掺入SA-HA水凝胶中，以制备治疗性水凝胶支架材料，用于修复大鼠软骨缺损。<br>　　结果：1、成功分离收集了海藻酸钠-透明质酸-MSCs来源的外泌体（3D-EVs），并利用电镜、纳米流式和WB等试验对其进行了表征；2、发现3D-EVs和ICA协同促进MSCs和炎性软骨细胞的增殖和3D迁移；3、3D-EVs和ICA联合治疗显示，大鼠软骨再生显著增强，可能的机制与抑制软骨降解因子和上调软骨合成因子有关；4、显示3D-EVs和ICA的联合治疗增强了MSCs和软骨细胞的增生和迁移。<br>　　结论：总之，MSC-EVs-ICA/SA-HA水凝胶可能构成一种新的治疗支架，用于有效修复膝骨关节炎软骨缺损。