检索历史 清除

摘要目的：<br>　　研究Caspase-11-GSDMD信号通路在老年小鼠年龄相关性听力损失中的作用，探究白皮杉醇对年龄相关性听力损失的保护作用机制，为把白皮杉醇开发为安全有效的应用于防治听力损失临床药物提供实验基础。<br>　　方法：<br>　　1.药效研究中随机将小鼠分为5组：年轻组(8周龄小鼠)、48周龄老年组、老年+PCT（2.5mg/kg）组、老年+PCT（5mg/kg）组和老年+PCT（10mg/kg）组。机制研究中随机将小鼠分为4组：年轻组、48周龄老年组、老年+BAY11-7082(5mg/kg)和老年+PCT（10mg/kg）组，PCT及BAY11-7082被溶解在蒸馏水中作为治疗药物。腹腔注射PCT，每天一次，持续7天。造模完成24h内检测小鼠听性脑干反应（AuditoryBrainResponse，ABR）；Hamp;E染色检测耳蜗组织病理学损伤；免疫组织化学检测蛋白表达情况；蛋白质免疫印迹检测ASC、NLRP3、NF-KB、Caspase-1、Caspase-4/11、GSDMD、IL-18和IL-1β等相关蛋白的表达水平。<br>　　2.D-gal+LPS模型建立：内耳毛细胞（HEI-OC-1）细胞随机分为以下实验组：（1）Control；(2)D-gal+LPS；(3)D-gal+LPS+PCT-2.5μM；(4)D-gal+LPS+PCT-5μM；(5)D-gal+LPS+PCT-10μM。为探索炎症小体抑制剂BAY11-7082对衰老炎症损伤的影响，机制研究中随机将内耳毛细胞（HEI-OC-1）分为以下实验组：（（1）Control；(2)D-gal+LPS；(3)D-gal+LPS+BAY11-7082(5μM)和(4)D-gal+LPS+PCT-10μM。随后，HEI-OC-1在30mg/kgD-gal和1μg/mLLPS共同培育条件下孵育48h。CCK-8检测细胞活力；DCFH-DA探针及流式细胞术检测细胞内ROS的水平变化；细胞免疫荧光检测核心蛋白表达水平；蛋白质免疫印迹检测NLRP3、NF-KB、ASC、Caspase-1、Caspase-4/11、GSDMD、IL-18和IL-1β等蛋白表达。<br>　　结果：<br>　　1.与年轻组小鼠相比，老年组的听力阈值明显抬高。PCT治疗可以有效缓解听力损失情况。HE结果显示，与年轻组相比，PCT治疗可减轻衰老小鼠体内累积炎症所诱导的老年听力损失，减轻小鼠内耳组织的病理学损伤。免疫组织化学结果表明，老年组小鼠耳蜗组织中的Caspase-11和NLRP3蛋白的表达水平显著高于年轻组小鼠，PCT治疗可抑制Caspase-11和NLRP3在耳蜗组织中的表达。WestrenBlot结果显示，与年轻组相比，老年组耳蜗组织中炎症小体NLRP3、ASC、NF-KB和细胞焦亡执行蛋白Caspase-11、Caspase-1、GSDMD、IL-1β和IL-18蛋白的表达明显增加，PCT治疗后呈现浓度依赖性下调。<br>　　2.CCK-8实验结果显示，HEI-OC-1细胞在模拟衰老炎症环境下，细胞活力下降，细胞损伤增加；PCT组明显提高细胞活力以及减轻损伤。流式细胞术以及DCFH-DA探针检测结果显示，与D-gal+LPS组相比，PCT明显降低细胞内ROS水平；细胞免疫荧光结果显示，与D-gal+LPS组相比，PCT组明显减少Caspase-4/11、NLRP3、GSDMD的蛋白荧光强度。蛋白免疫印迹结果显示PCT抑制细胞内炎症。此外，WestrenBlot结果显示，与D-gal+LPS组相比，PCT组明显降低了炎症小体NLRP3、ASC、NF-KB和细胞焦亡执行蛋白Caspase-11、Caspase-1、GSDMD、IL-1β和IL-18蛋白的表达。<br>　　结论：<br>　　本研究结果表明，PCT治疗可以减轻ARHL小鼠耳蜗损伤，其潜在机制可能是通过调控Caspase-11-GSDMD通路减少内耳细胞焦亡、抑制炎症的发生以及减轻ARHL小鼠的内耳结构损伤。