检索历史 清除

摘要C型凝集素结构域家族成员5A（C-typelectin-domainfamily5A，memberA，CLEC5A）是C型凝集素成员之一，参与多种疾病的发生发展。以往的研究表明，CLEC5A在多种黄病毒和肿瘤中异常表达。例如，在登革病毒（Denguevirus，DVs）和日本脑炎病毒（Japaneseencephalitisvirus，JEVs）感染中，CLEC5A的表达上调。以及在胃癌（Gastriccancer，GC）、胶质母细胞瘤（Glioblastoma，GBM）、骨肉瘤（Osteosarcoma，OS）和卵巢癌（OvarianCancer，OVC）患者中，CLEC5A的表达同样上调，并与患者较低的总体生存率显著相关，提示CLEC5A在多种肿瘤疾病中可能发挥促癌基因的功能。然而，目前关于CLEC5A基因对人白血病来源的THP-1和K562细胞的增殖与凋亡是否有影响及其具体的分子机制还尚未见报道。<br>　　本研究旨在探索CLEC5A对白血病细胞系THP-1和K562细胞的增殖、凋亡和周期进程的影响及其潜在的分子机制。我们首先构建了CLEC5A稳定过表达载体，并将其转染至THP-1和K562细胞系，获得稳定过表达CLEC5A的THP-1和K562细胞系；通过瞬时转染小干扰RNA（siRNA）到THP-1和K562细胞系，获得瞬时敲低CLEC5A的THP-1和K562细胞系。随后通过一系列的细胞表型实验，发现过表达CLEC5A可显著促进THP-1和K562细胞的增殖能力，显著抑制THP-1和K562细胞在过氧化氢（Hydrogenperoxide，H2O2）刺激条件下的凋亡能力，并导致G1期细胞减少、S期细胞增多；反之，敲低CLEC5A可显著抑制THP-1和K562细胞的增殖能力，显著促进THP-1和K562细胞在H2O2刺激条件下的凋亡能力，导致G1期细胞增多、S期细胞减少。上述结果初步提示CLEC5A在THP-1和K562细胞中发挥促进生长的功能。<br>　　随后，我们进一步探索了CLEC5A在THP-1和K562细胞中的作用机制。我们通过Westernblotting实验发现CLEC5A可显著促进AKT/mTOR通路蛋白的表达，抑制p53通路蛋白的表达。此外，我们也检测了与细胞凋亡相关蛋白BAX、BCL-2的表达水平。结果显示，过表达CLEC5A后可显著促进细胞存活促进因子BCL-2的表达水平，降低了促凋亡基因BAX的表达。最后，为了探索CLEC5A的潜在临床意义，我们分析了基因表达谱交互分析（Geneexpressionprofilinginteractiveanalysis，GEPIA2）数据集中的白血病、胰腺癌（Pancreascancer，PC）和卵巢浆液性囊腺癌(Ovarianserouscystadenocarcinoma，OV)组织样本和健康人群组织样本或癌旁组织样本的表达谱数据及患者的临床信息。结果显示，CLEC5A在这些癌组织中的表达水平显著高于健康人群组织或癌旁组织。虽然在PC患者中，CLEC5A的表达水平与PC患者的不良预后无显著的相关性，但在OV患者中，CLEC5A的表达水平与OV患者的总体生存率具有显著的相关性。<br>　　综上所述，我们通过细胞表型实验初步证明了CLEC5A在THP-1和K562细胞中作为促癌基因发挥其相应的生物学功能，进一步的机制探索也初步显示CLEC5A可能通过影响AKT1-mTOR和p53通路而促进细胞的生长。此外，CLEC5A在多种肿瘤组织中显著高表达，提示CLEC5A可能成为多种癌症预后的潜在分子标志物。