检索历史 清除

摘要目的：以丝素蛋白和褐藻多酚为原料构建新型双层丝素蛋白膜，并测试其湿态环境下的力学性能、细胞黏附能力、生物相容性及促成骨作用等，探究其作为引导骨再生(GuidedBoneRegeneration,GBR)屏障膜的可能性。<br>　　方法：将不同脱胶时间处理后的丝素蛋白(SilkFibron,SF)溶液通过溶液浇筑技术、定向冷冻技术以及冷冻干燥技术处理后制备成SF双层膜。采用力学万能实验机对各组膜样品(n=5)的抗拉强度进行测量。取抗拉强度最大的SF双层膜组对应脱胶时长的SF溶液重新制备膜样品，在扫描电镜(ScanningElectronMicroscope,SEM)下观察其微观结构。通过在粗糙面负载褐藻多酚(Phlorotannins,PT)制备PT-SF双层膜，使用傅里叶红外光谱仪(FourierTransformInfraredSpectrometer,FTIR)分析PT与SF之间的相互作用；门诊收集人牙槽骨，提取干细胞并通过流式细胞术对所提取细胞进行鉴定；在PT-SF双层膜粗糙面上接种人牙槽骨来源的骨髓间充质干细胞(hABMSCs)并利用SEM观察细胞在粗糙面的黏附情况；通过CCK-8及细胞活力染色探究PT-SF双层膜的生物相容性；qRT-PCR法检测成骨相关基因：碱性磷酸酶(AlkalinePhosphatase,ALP)、RUNX相关转录因子2(RUNXFamilyTranscriptionFactor2,RUNX2)和成骨细胞特异性转录因子(Osterix,OSX)的表达，并结合ALP染色和茜素红染色探究PT-SF双层膜对hABMSCs的成骨分化的影响。<br>　　结果：SF双层膜的抗拉强度随蚕丝脱胶时间的增加而降低，由脱胶时间为30min的SF溶液制备出的SF双层膜的湿态抗拉强度最大，达(3.293±0.276)MPa。在SEM下可见SF双层膜的光滑面致密光滑，粗糙面呈纵向有序排列的疏松多孔结构。FTIR结果显示PT通过氢键、疏水作用力等方式负载到SF双层膜的粗糙面上。hABMSCs可在PT-SF的粗糙面上附着，CCK-8及细胞活力染色结果显示空白组、SF组及PT-SF组之间无明显差异。q-PCR结果显示与未结合PT的SF组相比，PT-SF组的ALP、RUNX2及OSX基因表达均上调；同时ALP染色与茜素红染色结果也显示，与空白组和SF组相比，在成骨诱导7d后PT-SF组的ALP阳性结果更加明显，并且在成骨诱导14d后PT-SF组出现了更明显的钙盐沉积。结果表明PT-SF双层膜可促进hABMSCs的成骨向分化。<br>　　结论：PT-SF双层膜的致密层可在湿态条件下为其提供良好的力学性能，而其多孔层的粗糙表面可为hABMSCs提供黏附位点。体外实验证实PT-SF双层膜具有良好的生物学相容性，并可在一定程度上促进hABMSCs的成骨向分化。以上结果表明本研究成功制备了PT-SF双层膜，这为下一步体内实验奠定了坚实基础。