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摘要研究背景：细菌感染对人类健康造成极大的危害，尤其是抗生素的滥用使细菌产生耐药性。针对耐药细菌的治疗亟需开发新型抗菌策略。有报道将光热疗法(PTT)与化学动力疗法(CDT)联合，协同抗菌增强抗菌效果。其中，光热疗法显示出许多优点，比如无创性，可控性，广谱抗菌活性，以及不易产生耐药等。在此基础上，将无机纳米颗粒与光热疗法联用，能够增强其抗生物膜的作用且不易产生耐药，纳米颗粒在近红外光照射下能够使局部温度升高以破坏菌膜并杀死膜内的细菌。硫化铜纳米颗粒(CuSNPs)是优良的近红外光热转化材料，具有生物相容性良好，易合成，毒性低等优点。CuS纳米颗粒在近红外光的照射下将光能转化为热能，通过光热治疗杀死细菌。化学动力疗法是一种新兴的抗菌治疗方法，利用细菌感染微环境的酸性条件，在过氧化氢的存在下，硫化铜纳米颗粒具有类过氧化物酶活性，能够有效的催化过氧化氢分解产生有抗菌活性的羟自由基，发挥抗菌作用。<br>　　研究目的：本实验目的是依赖于简单合成具有良好分散性、稳定性和生物相容性的CuS-BSANPs，以在808nmNIR下有效控制释放蛋白酶和抗生素，联合化学动力疗法和光热疗法，以增强其抗菌作用，并最大限度地减少细菌的耐药。<br>　　研究方法：首先，通过一步合成法在高温下将庆大霉素(Gen)包裹在CuS@BSA内，并在表面进一步修饰碱性蛋白酶，从而制备一种新型的抗菌纳米颗粒Gen@CuS@BSA/Protease。其次通过动态光散射仪、扫描电镜等仪器表征Gen@CuS@BSA/Protease的形态大小表面电势等。接着通过808nm激光器和紫外分光光度计评估Gen@CuS@BSA/Protease的光热升温性能，光热稳定性以及光热转化能力。此外通过TMB和MB实验检测了该纳米颗粒的类过氧化物酶活性和催化生成羟自由基的能力。进一步探讨了Gen@CuS@BSA/Protease纳米颗粒的抗菌效果以及抗生物膜效果，用铜绿假单胞菌作为细菌感染模型进行体外抗菌实验，验证了该纳米颗粒的杀菌和抗生物膜活性。然后建立了铜绿假单胞菌感染的小鼠皮肤脓肿模型评价Gen@CuS@BSA/Protease纳米颗粒的体内抗菌效果。<br>　　研究结果：成功制备了Gen@CuS@BSA/Protease纳米颗粒，该纳米颗粒粒径较小为49.96nm，大小均一，稳定性良好。经过808nm近红外光照射后，25μg/mL的Gen@CuS@BSA/Protease纳米颗粒在10分钟内可以快速升温至50℃，并且经过5个周期的激光开启关闭循环检测后表明该纳米颗粒的光热稳定性好，同时具有较高的光热转换效率37.5%。TMB和MB实验结果显示，在材料中加入过氧化氢后，能够在652nm处观察到特征性吸收峰，且该材料可以催化过氧化氢分解产生大量羟自由基，具有浓度依赖性和温度依赖性。这表明Gen@CuS@BSA/Protease纳米颗粒具有类过氧化物酶活性，可以通过生成羟自由基实现化学动力疗法，达到有效的抗菌效果。体外抗菌结果显示Gen@CuS@BSA/Protease纳米颗粒在有过氧化氢存在时，经过近红外光照射的抗菌效果最好，扫描电镜显示经Gen@CuS@BSA/Protease+H2O2+NIR处理后的细菌细胞壁变得粗糙，细菌形态被破坏。结晶紫和共聚焦结果显示，Gen@CuS@BSA/Protease+H2O2+NIR处理组能够抑制生物膜的形成。体外实验结果显示，Gen@CuS@BSA/Protease+H2O2+NIR治疗组的小鼠脓肿部位恢复最快，疤痕最小，表明该纳米颗粒在化学动力疗法协同光热疗法时发挥了更优的抗菌能力。<br>　　结论：本文成功制备了Gen@CuS@BSA/Protease纳米材料，能够协同CDT/PTT治疗铜绿假单胞菌感染，有效地增强抗菌效果。