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摘要背景：肝癌仍然是一个全球性的健康挑战，其中肝细胞肝癌（HepatocellularCarcinoma,HCC）作为全球癌症相关死亡率的第四大原因，约占肝癌比例的90%，各种因素，包括黄曲霉素B1暴露、HBV和HCV感染、AALD、肥胖、NAFLD和血色病，以及遗传疾病（如肿瘤抑制因子或者癌症基因突变），均可促进HCC的发生。在我国，虽然HCC的治疗更加多样化和个体化，但5年生存率仍难以提高。大多数HCC确诊时已属晚期，因此需要阐明HCC发生发展的重要分子机制和判断HCC的预后，从而制定HCC防治的新策略。NME2(non-metastaticcells2)，也被称为NM23-H2或NDPKB，位于染色体17q21上，编码核苷二磷酸激酶B亚基。NME2是一种参与基因转录调控的转移相关蛋白，在恶性肿瘤中存在差异表达，可能参与了癌症的病理过程。但NME2在HCC中的报道较少，我们前期通过生物信息学挖掘得出NME2在HCC中高表达，并且NME2的表达与自噬的调控有关。为了进一步阐明NME2对HCC恶性行为的影响和机制，本研究以NME2为出发点，探究NME2在HCC中所发挥的作用及其作用机制。<br>　　目的：（1）明确NME2在HCC患者中的表达以及与临床预后的关系。（2）体内体外验证NME2在HCC中的作用。（3）探究NME2对HCC自噬的影响及其作用机制。<br>　　方法：(1)免疫组化染色评估组织芯片中96例HCC患者癌和癌旁NME2表达量。完善96例HCC患者随访数据。(2)通过小干扰RNA和慢病毒转染构建NME2敲除肝癌细胞株Huh7和HepG2。Westernblot验证NME2成功敲除后，通过细胞克隆和MTT增殖验证NME2敲除对HCC细胞增殖的影响。(3)构建NME2敲除和过表达的Huh7细胞系，用于裸鼠皮下肿瘤形成。15只健康的裸鼠随机分为3组：对照组、NME2敲除组和NME2过表达组，每组5只。观察NME2在体内对肝癌增殖的影响。(4)Westernblot检测敲除NME2后Huh7细胞中LC3B、Beclin-1、P62、ATG5的变化。(5)利用激光共聚焦显微镜和透射电镜观察NME2敲除对HCC细胞自噬体和自溶酶体的变化。(6)采用免疫组化方法验证裸鼠肿瘤组织中NME2与LC3B蛋白的相关性。(7)体外验证NME2对自噬相关通路蛋白的影响，并进行反向验证。<br>　　结果：（1）NME2在HCC患者中相对高表达，与患者5年生存率呈负相关。（2）在Huh7和HepG2中敲除NME2可以抑制HCC细胞的增殖与克隆。（3）NME2在体内裸鼠移植瘤实验中可以促进肿瘤的增殖（4）NME2敲低可以上调Huh7细胞LC3B(Ⅰ和Ⅱ)蛋白表达，氯喹（CQ）联合NME2敲低比单独NME2敲低诱导更多LC3B(Ⅰ和Ⅱ)蛋白表达。(5)在激光共聚焦显微镜和透射电镜下发现，与对照组相比，敲除NME2可使Huh7细胞自噬体和自噬溶酶体数量增加。(6)CQ可以逆转NME2敲低对Huh7细胞增殖的影响。（7）NME2过表达的细胞和裸鼠肿瘤组织中LC3B蛋白表达降低。（8）NME2可以调控4EBP1磷酸化水平，并且4EBP1Thr37/46位点的突变抵消了NME2敲除对HCC细胞自噬激活和抑制增殖的能力。<br>　　结论：（1）NME2在HCC中高表达，与患者预后呈负相关，并且具有促进肿瘤增殖的功能。（2）NME2可以通过激活自噬促进HCC细胞增殖。（3）P-4EBP1介导了NME2对HCC自噬和增殖的调控。